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Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Injeção do Nervo Óptico
- Anestesiar o animal com injeção intraperitoneal de cetamina (75 mg/kg) e medetomidina (0,5 mg/kg).
nota: Após a indução anestésica, observe os reflexos de retirada (teste de pinça, reflexo corneano e palpebral, etc.) e sua ausência como indicação para iniciar a cirurgia. Monitore continuamente os animais durante a cirurgia e administre o medicamento anestésico adicional (10% da dose inicial de cetamina por recarga) se os reflexos estiverem presentes. Ratos adultos (>12 semanas) são usados nos experimentos.
- Depile a pele da área cirúrgica. Coloque o animal em uma almofada de aquecimento (37 °C) para manter a temperatura corporal durante a cirurgia. Prepare a pele através da aplicação tópica de iodopovidona. Aplique drapeados cirúrgicos. Aplique pomada oftálmica tópica para evitar o ressecamento da córnea sob anestesia geral. Mantenha a assepsia usando instrumentos estéreis.
- Faça uma incisão de 1 a 1,5 cm na pele acima da órbita de um olho selecionado aleatoriamente. Abra o tecido subcutâneo para alcançar a cavidade orbital usando uma tesoura de íris fina. Abra a conjuntiva e a cápsula de Tenon anterior sob o microscópio cirúrgico.
- Retraia os músculos extraoculares e as glândulas lacrimais intraorbitais para expor aproximadamente 3 mm de comprimento do nervo óptico. Abra as camadas de dura-máter e matéria aracnoide ao redor do nervo óptico longitudinalmente usando uma lâmina oftálmica.
- Insira a pipeta de vidro no nervo óptico a uma distância de 2 mm posterior ao globo. A micropipeta de vidro é conectada a uma seringa Hamilton.
- Injete 1% de lisolecitina (0,4 - 1,0 μl, com 0,02% de azul de Evan, que não tem efeitos na mielinização) lentamente no nervo aproximadamente durante um período de 30 segundos.
- Suturar a incisão na pele. Aplique pomada antibiótica para prevenir infecções. Os olhos de outros podem ser servidos como controles internos para registros de eletrofisiologia.
- Coloque os animais em uma almofada de aquecimento para se recuperar da anestesia.