Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Anestesia e preparação
- Coloque o animal na câmara de anestesia e induza a anestesia geral com isoflurano a 1,8% e oxigênio a 0,9 L/min.
- Confirme um plano adequado de anestesia por meio de uma avaliação da respiração espontânea e uma avaliação da consciência, avaliando a resposta da careta do animal a um beliscão do dedo do pé.
- Aplique lubrificante ocular bilateralmente para evitar irritação ou ressecamento da córnea.
- Raspe o(s) local(is) operatório(s) com uma navalha ou aparador automático.
- Estabeleça um método para identificação de ratos neste momento, seja por meio de uma marca auricular ou rótulo/marcação da cauda.
- Administre uma injeção subcutânea de 0,05 mg / kg de buprenorfina ao longo das costas do animal para profilaxia contra a dor pós-operatória.
2. Abordagem cirúrgica e padrões de lesão
- Transfira o animal para a mesa de operação e continue o fluxo de gás através de um nariz. Certifique-se de que uma almofada de aquecimento esteja posicionada embaixo do animal e do campo estéril para manter a temperatura corporal.
- Coloque gaze esterilizada (enrolada e presa com fita adesiva) no pescoço do rato para usar como rolo de pescoço; isso aumentará a exposição do campo cirúrgico. Observe que o posicionamento adequado do animal é fundamental para a identificação e dissecção eficientes dos nervos.
- Prepare a pele facial do animal para o procedimento. Para garantir a desinfecção, esfregue o local da cirurgia três vezes com clorexidina ou uma solução à base de iodo alternando com etanol a 70%.
- Planeje e marque a incisão cirúrgica, se desejar. Manipule a orelha ipsilateral na direção ântero-posterior para determinar a dobra natural da pele pós-auricular.
- Faça uma incisão de 4-5 mm na prega pós-auricular usando uma tesoura de íris afiada ou uma lâmina número 15. Isso pode ser expandido posteriormente no procedimento, conforme necessário.
- Disseque sem corte através da fáscia subcutânea imediata e coloque um afastador micro-Weitlaner para aumentar a exposição. Observe que pode haver vasos sanguíneos de pequeno calibre nesta área; é melhor evitá-los retraindo-se superior ou inferiormente por meio do afastador Weitlaner.
- Identifique o músculo digástrico anterior à medida que ele se desloca na direção inferior-superior em direção à sua inserção ao longo da base do crânio.
- Espalhe suavemente pelo ventre muscular ao longo de seu ponto de inserção para revelar o tendão do ventre digástrico anterior. Observe que o tendão aparece como um processo branco transparente que emana do músculo com uma inserção sólida na base do crânio.
- Após a identificação do músculo digástrico anterior e seu tendão, ajuste o afastador Weitlaner para retrair ainda mais o ventre muscular. Observe que a região subseqüentemente exposta é o espaço tridimensional onde se encontra o tronco principal do nervo facial.
nota: Essa região é delimitada superior e medialmente pela base do crânio, lateralmente pelo músculo digástrico anterior, posteromedialmente pelo canal auditivo e inferiormente pelas estruturas do pescoço, incluindo a artéria temporal superficial.
- Após a exposição adequada, identifique o tronco principal do nervo facial à medida que ele se desloca inferiormente por baixo do tendão do músculo digástrico, onde sai do forame estilomastóideo da base do crânio. Observe que o nervo aparece como um cordão branco perolado envolto na fáscia parótida-massetérica do animal. Tenha cuidado ao expor ainda mais o nervo pelos seguintes motivos.
- Evite dissecção agressiva ou propagação perpendicular para se proteger contra lesão de neuropraxia mediada por estiramento.
- Evite a dissecção agressiva direcionada posteriormente e medialmente para evitar a violação dos tecidos finos que recobrem o canal auditivo, pois isso pode introduzir a flora do ouvido médio no campo cirúrgico.
- Evite danificar a artéria temporal superficial por meio de dissecção ampla direcionada medial e inferiormente. Observe que uma lesão será identificada por sangramento rápido e pulsátil.
- Se a artéria estiver lesionada, aplique pressão imediata com um aplicador com ponta de algodão ou gaze estéril por meio de uma pinça. Agentes hemostáticos ou selante de fibrina líquida podem ser colocados nas proximidades. Lembre-se de que o animal pode precisar de uma injeção subcutânea de solução salina estéril a 0,9% para estabilização de fluidos.
- Trace o tronco principal distalmente, dissecando ao longo do nervo em uma direção inferior, distalmente a partir da saída do forame estilomastóideo.
- Estenda a incisão original para expor totalmente o nervo e seus ramos. Evite romper a glândula parótida, pois isso pode resultar em sialocele pós-operatória.
- Induza os padrões de lesão desejados da seguinte forma.
- Para uma lesão por esmagamento, use uma pinça de joalheiro de superfície lisa para segurar firmemente o nervo e comprimi-lo9. Aplique pressão constante e reprodutível no nervo por 30 segundos para garantir uma lesão por esmagamento apropriada.
- Para uma transecção simples, segure a fáscia que cobre o nervo, ou o epineuro imediato, com uma pinça de dentes finos, e use uma microtesoura afiada para cortar o nervo no ponto desejado com um único corte. Tome cuidado para evitar o excesso de tração no nervo com a pinça.
- Para um modelo de lacuna nervosa, crie a lacuna nervosa desejada usando um método semelhante à lesão de transecção simples. Use a haste esterilizada de um aplicador com ponta de algodão cortado no comprimento desejado da lacuna nervosa no intraoperatório para garantir a semelhança do padrão de lesão entre os animais.
3. Fechamento da ferida
- Irrigue a ferida com solução salina estéril e seque-a com gaze estéril.
- Aproxime as bordas da pele de maneira simples e subcuticular com suturas absorvíveis ou use cola para a pele ou clipes para feridas, que também são aceitáveis para o fechamento da ferida. Coloque um ponto enterrado dando uma mordida profunda a superficial em uma borda da pele e, em seguida, uma mordida superficial a profunda subsequente na borda oposta da pele.
