$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Craniectomia e impacto cortical controlado
- Preparação do dispositivo de impacto cortical controlado e suprimentos cirúrgicos.
- Carregue uma seringa de ponta deslizante de 1 mL com 0,5 mL de solução salina estéril para irrigação de feridas. Coloque uma agulha de 25 G na seringa para controlar a irrigação.
- Preparar uma solução diluída de ciclosporina A (CsA) em dimetilsulfóxido (DMSO) até uma concentração final de 1 mg/ml. Carregue uma segunda seringa de ponta deslizante de 1 mL com 0,5 mL de solução de CsA para imunossupressão. Coloque uma agulha de 25 G ou maior na seringa de CsA.
- Prenda o pistão de impacto cortical controlado a um braço em uma estrutura estereotáxica e ajuste-o para um ângulo de 15 °. Conecte uma sonda de impacto de 3 mm ao pistão.
- Defina a velocidade do impacto para 1.5 m/s e o tempo de permanência do impacto para 0.1 s para produzir uma lesão cortical leve.
- Realize uma craniectomia unilateral
- Coloque o mouse em uma câmara de indução de anestesia conectada a um vaporizador de isoflurano com uma fonte de oxigênio comprimido. Induza a anestesia com ~ 3% de isoflurano a ~ 0,7 L / min de oxigênio. Verifique a profundidade da anestesia pela falta de resposta ao beliscão do dedo do pé.
- Raspe o couro cabeludo usando uma tesoura elétrica e limpe qualquer pelo solto.
- Coloque o mouse em uma estrutura estereotáxica com um cone de nariz de administração de anestésico anexado.
- Coloque uma almofada de aquecimento a 37 °C na estrutura estereotáxica sob o mouse para manter a temperatura corporal sob anestesia. Fixe a cabeça no lugar com barras auriculares e uma barra de mordida e oriente a cabeça de forma que o osso frontal do crânio fique na horizontal. Mantenha a anestesia em ~ 1,5% -2% de isoflurano durante a cirurgia.
- Para realizar cuidados pré-operatórios e preparação cirúrgica asséptica, aplique pomada oftálmica antibiótica nos olhos usando um cotonete estéril. Aplique uma solução à base de iodo na área do couro cabeludo raspado. Remova isso com etanol 70%. Cubra o animal com uma cortina cirúrgica fenestrada para que o topo da cabeça fique visível, mas os olhos cobertos.
- Faça uma incisão na linha média (1,5-2 cm) no couro cabeludo usando um bisturi ou tesoura. Use cotonetes estéreis para limpar a ferida e limpar a fáscia esquerda da linha média na bregma.
- Use a sonda do impactor para identificar o local da craniectomia.
- Defina o ponto de referência estereotáxico (X = 0, Y = 0) para bregma. Ajuste a sonda lateralmente a 2 mm à esquerda da linha média. Contorne um círculo de 5 mm de diâmetro ao redor da sonda usando um marcador de ponta fina cirurgicamente seguro. Levante e gire o pêndulo para fora da posição.
- Use a ferramenta manual do kit de micromotor rotativo de alta velocidade para fazer um orifício aberto no crânio usando uma broca de rebarba de ponta redonda de 0,6 mm ou 0,8 mm a ~ 70% -80% da velocidade máxima. Aplique uma leve pressão no crânio enquanto perfura ao longo do contorno circunferencial de 5 mm para afinar essa borda.
- Não aplique pressão excessiva durante a perfuração. Vibração, compressão ou penetração acidental podem causar lesões corticais. Em vez disso, permita que a velocidade da broca faça o trabalho.
- Não perfure em nenhum local por muito tempo para evitar o aquecimento excessivo do crânio. Irrigue a craniectomia ocasionalmente com solução salina estéril para remover detritos e reduzir o aquecimento da ferramenta rotativa.
- Preste muita atenção ao perfurar a linha de sutura coronal, pois esses pontos são vulneráveis a hemorragias.
- Use uma pinça fina para remover o retalho do crânio quando o contorno da craniectomia estiver suficientemente afinado. Segure a aba medialmente e levante e puxe suavemente lateralmente com um movimento radial.
- Não danifique a dura-máter ao levantar o retalho; isso pode causar ferimentos graves e hemorragia.
- Realize uma lesão de impacto cortical leve e controlada
- Limpe a sonda do impactor com uma almofada de preparação de álcool estéril. Mova a sonda do impactor de volta para a posição sobre o córtex exposto. Abaixe a sonda até que ela toque a superfície da dura-máter. Marque esta posição como Z = 0.
- Retire o pistão e mova para Z = -1.0 mm. Descarregue o pistão para impactar o córtex.