Estabelecendo uma infecção ativa pelo HIV em um modelo de rato

Resumo

Fonte: Li, H., McLaurin, et al. Um modelo de rato de infecção cerebral por EcoHIV. J. Vis. Exp. (2021).

Este vídeo demonstra o procedimento de injeção de vírus HIV quiméricos no córtex do cérebro de um rato, onde o RNA do vírus se integra ao genoma do hospedeiro, se replica e se espalha para estabelecer uma infecção ativa pelo HIV no modelo experimental.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Cirurgias estereotáxicas do vírus EcoHIV-EGFP [Ecotropic HIV Enhanced Green Fluorescent Protein]

1. Anestesiar ratos com sevoflurano a 3%. Quando os ratos não respondem a estímulos nocivos e seus reflexos estão ausentes, prossiga para a etapa 1.2.
2. Raspe os pelos da região do cérebro e esterilize a pele duas vezes com etanol 70% e um esfoliante à base de clorexidina. Fixar o rato em decúbito ventral no aparelho estereotáxico.
3. Faça uma incisão (5-6 cm) através da pele ao longo da linha média do couro cabeludo.
4. Marque duas posições de perfuração em 0,8 mm lateral, 1,2 mm rostral a bregma. Faça um furo (diâmetro de 0,4 mm) em cada posição do crânio.
5. Encher a solução titulada de lentivírus EcoHIV (1,04 × 10⁶ TU/ml) numa seringa de injeção de 10 μL. Prenda a seringa ao aparelho estereotáxico.
6. Desça a agulha perto da superfície do furo. Meça e mova 2,5 mm de profundidade.
7. Infundir 1 μL de solução de vírus a uma taxa de 0,2 μL / min. Mantenha a agulha dentro da área de injeção por 5 min. Mova lentamente a agulha para cima até que esteja fora do crânio do rato.
8. Suturar a pele com um fio de seda 4-0.
9. Esterilize a incisão com etanol 70% uma vez. Injete butorfanol por via subcutânea (Dorolex, 0,1 mg / kg de peso corporal).
10. Transfira o rato para uma câmara de recuperação com uma almofada de aquecimento até que ele acorde.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Solução antibiótico-antimicótica	Cellgro	30004CI	100X
Vidro de cobertura	VWR	Nº 637-137
broca
Antibacteriano Ethicon Vicryl Plus, 4-0 Poliglactina 910 Sutura, 27in. FS-2	Med Vet Internacional	VCP422H
Seringa Hamilton	Hamilton	1701
Pinça de íris	Instrumentos de precisão mundiais	Rolamento 15914
Tesoura de íris	Instrumentos de precisão mundiais	500216
Aparelhos estereotáxicos	Instrumentos Kopf	Modelo 900
Tesoura Vannas	Instrumentos de precisão mundiais	500086