Realizando lesão cerebral induzida por laser em um modelo de rato

Resumo

Fonte: Kuts, R., et al. Lesão cerebral induzida por laser no córtex motor de ratos. J. Vis. Exp. (2020)

Este vídeo demonstra um procedimento para gerar lesões cerebrais precisas e controladas no córtex motor de ratos usando um laser.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Procedimento experimental de lesão cerebral induzida por laser

1. Anestesiar o rato com uma mistura de isoflurano a 2% em oxigênio, permitindo ventilação espontânea. Verifique se há profundidade anestésica suficiente beliscando a cauda com uma pinça para ver se o reflexo de retirada está ausente.
2. Usando uma almofada de aquecimento retal regulada por temperatura, mantenha a temperatura corporal central do rato em 37 ° C durante todo o procedimento experimental.
3. Remova os pelos locais com um barbeador e desinfete-os com álcool 70% e gluconato de clorexidina 0,5%. Repita a etapa de desinfecção mais duas vezes.
   NOTA: A incisão cirúrgica deve ter aproximadamente 3 cm de largura. Remova os pelos pelo menos 2 cm ao redor da área da incisão.
4. Coloque o rato em um suporte de cabeça estereotáxico em decúbito ventral. Faça uma incisão de 3 cm para refletir o couro cabeludo lateralmente e expor a área entre Bregma e Lambda.
5. Mantenha a anestesia através do cone do nariz.
6. Use laser de neodímio-YAG (Nd-YAG) (comprimento de onda de pico de 1064 nm) para administrar 50pontos J X 10, com duração de pulso de 1 s, na área exposta do crânio acima do hemisfério direito.
7. Certifique-se de que a parte geradora de laser do aparelho esteja a 2 mm de distância da área exposta para produzir um feixe de laser. 50pontos J X 10 foram selecionados após avaliação cuidadosa de diferentes combinações de energia/superfície. Essa combinação é eficiente e não causa destruição óssea do crânio após administração por menos de um segundo.
   NOTA: 2 mm é a distância entre o terminal do feixe de laser (a partir do cabo óptico pelo qual ele é passado) e o osso do crânio. Caso seja utilizada uma lente de foco, a distância deve ser calculada, levando em consideração o ângulo de inclinação da lente para focar o feixe na área de dano desejada. Garanta a segurança adequada ao usar um dispositivo a laser, incluindo treinamento adequado e proteção para os olhos.
8. Remova o rato do dispositivo e feche o couro cabeludo com suturas cirúrgicas de seda 3-0.
9. Interrompa a anestesia e devolva o rato à gaiola para recuperação. Administrar 0,1 mL de bupivacaína a 0,25% localmente para reduzir a dor pós-operatória imediatamente após a cirurgia.
   nota: Todo o procedimento deve durar menos de 5 minutos se realizado corretamente.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Matrizes de Cérebro & Tecido	SIGMA - ALDRICH	Rolamento 15013
Balança Digital	SIGMA - ALDRICH	RS 4000
Etanol 96 %	ROMÂNTICO		Líquido inflamável
Aquecedor com termômetro	Almofada de aquecimento-1	Modelo: HEATINGPAD-1/2
Manguito de infusão	Abn	IC-500
Isoflurano, USP 100%	Cuidados Intensivos Piramamal, Inc	NDC 66794-017
Lâminas de bisturi 11	SIGMA - ALDRICH	S2771
Máquina a laser Sharplan 3000 Nd:YAG (granada de ítrio e alumínio dopada com neodímio)	Indústrias de laser Ltda
Porta-cabeça estereotáxico	KOPF	900LS