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Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Materiais
- Preparação da injeção de LPS
- Adicione 25 mL de água destilada a 25 mg de LPS em pó derivado de Salmonella typhimurium até uma concentração final de 1 mg / mL. Conservar a injecção num tubo estéril a 4 °C.
cuidado: LPS é tóxico.
2. Animais
- Administrar LPS a ratos Sprague-Dawley (SD) machos, com 10 semanas de idade (peso médio: 280 ± 20 g) por injeção intraperitoneal.
cuidado: Se os ratos forem comprados de outra organização, a fase adaptativa não deve ser inferior a 7 dias.
3. Injeções de LPS
- Injete LPS por via intraperitoneal em cada rato na dose de 1 mg / kg e devolva os ratos à sua gaiola de origem.
nota: A anestesia não é necessária.
- Seis horas depois, injete a mesma dose de injeção de LPS nos ratos.
- Dezesseis horas depois, injetar a mesma dose de LPS nos ratos.
cuidado: A injeção de LPS em ratos SD na dose de 1 mg / kg pode resultar em uma taxa de mortalidade de 5%. A taxa de mortalidade pode aumentar ainda mais em ratos mais jovens ou mais velhos ou em ratas grávidas.
- Devolva os ratos às suas gaiolas após a injeção de LPS e forneça acesso ad libitum a alimentos e bebidas.
nota: Os ratos exibirão uma resposta inflamatória sistêmica distinta e, portanto, as gaiolas devem permanecer limpas durante todo o experimento. Os ratos devem ser monitorados com frequência (2x dia) quanto ao peso, aparência geral e atitude após a primeira injeção de LPS. Se os ratos começarem a exibir uma postura curvada, falta de vontade de se mover, perda de peso significativa (>20%) ou coloração com porfirina, eles devem ser sacrificados humanamente antes do desfecho do estudo de 7 dias.