Indução de micro-hemorragias cerebrais em modelo de rato usando lipopolissacarídeo

Resumo

Fonte: Li, D., et al. Micro-hemorragias cerebrais subagudas induzidas por injeção de lipopolissacarídeo em ratos. J. Vis. Exp. (2018).

Este vídeo demonstra o processo de indução da ruptura da barreira hematoencefálica (BHE) e micro-hemorragias cerebrais em um modelo de rato usando lipopolissacarídeo (LPS). Ele destaca a sequência de respostas imunes que levam ao aumento da permeabilidade da BHE e subsequente dano ao tecido cerebral.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Materiais

1. Preparação da injeção de LPS
   1. Adicione 25 mL de água destilada a 25 mg de LPS em pó derivado de Salmonella typhimurium até uma concentração final de 1 mg / mL. Conservar a injecção num tubo estéril a 4 °C.
      cuidado: LPS é tóxico.

2. Animais

1. Administrar LPS a ratos Sprague-Dawley (SD) machos, com 10 semanas de idade (peso médio: 280 ± 20 g) por injeção intraperitoneal.
   cuidado: Se os ratos forem comprados de outra organização, a fase adaptativa não deve ser inferior a 7 dias.

3. Injeções de LPS

1. Injete LPS por via intraperitoneal em cada rato na dose de 1 mg / kg e devolva os ratos à sua gaiola de origem.
   nota: A anestesia não é necessária.
2. Seis horas depois, injete a mesma dose de injeção de LPS nos ratos.
3. Dezesseis horas depois, injetar a mesma dose de LPS nos ratos.
   cuidado: A injeção de LPS em ratos SD na dose de 1 mg / kg pode resultar em uma taxa de mortalidade de 5%. A taxa de mortalidade pode aumentar ainda mais em ratos mais jovens ou mais velhos ou em ratas grávidas.
4. Devolva os ratos às suas gaiolas após a injeção de LPS e forneça acesso ad libitum a alimentos e bebidas.
   nota: Os ratos exibirão uma resposta inflamatória sistêmica distinta e, portanto, as gaiolas devem permanecer limpas durante todo o experimento. Os ratos devem ser monitorados com frequência (2x dia) quanto ao peso, aparência geral e atitude após a primeira injeção de LPS. Se os ratos começarem a exibir uma postura curvada, falta de vontade de se mover, perda de peso significativa (>20%) ou coloração com porfirina, eles devem ser sacrificados humanamente antes do desfecho do estudo de 7 dias.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Lps	Sigma-Aldrich	L-2630	para indução de inflamação
Tampão fosfato salino (PBS)	Solarbio	Pág. 1022	um tipo de solução tampão comumente usada em experimentos