Um modelo in vitro de lesão por estiramento em neurônios derivados de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos

Resumo

Fonte: Phillips, J. K. et al. Método para lesão por estiramento de alta velocidade de neurônios derivados de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos em um formato de 96 poços. J. Vis. Exp. (2018)

Este vídeo demonstra o processo de indução de lesão por estiramento em neurônios derivados de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos (hiPSCNs). As células são retiradas em uma placa sem fundo de vários poços com uma membrana de silicone conectada. O estresse mecânico controlado é aplicado na membrana para induzir a ruptura do citoesqueleto e danos à membrana celular, induzindo um fenótipo de lesão por estiramento nas células.

Protocolo

1. Fabricação de placas

1. Trate a plasma um topo de placa de 96 poços com um limpador de plasma de 200 W (consulte a Tabela de Materiais) por 60 s em alta potência, colocando-o de baixo para cima dentro do limpador de plasma. Verifique se há um brilho roxo visível através da janela da câmara, o que indica que um plasma efetivo se formou. Esta técnica de colagem é adaptada de Sunkara et al.
2. Dentro de 60 s, coloque o topo da placa em 200 mL de trietoxissilano (APTES) a 1,5% (3-aminopropil) em água deionizada (DI) por 20 min, com o lado inferior para baixo. Esta solução é instável: prepare-a no máximo 60 s antes de i....

Resultados

Figura 1: Um esquema rotulado do dispositivo de lesão.(A) Vista superior, (B) vista isométrica, (C) vista frontal, (D) vista lateral direita. A barra de escala aplica-se às vistas ortogonais (A, B e D).

....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
.010 "Folha de Silicone	Fabricação Especializada, Inc	#70P001200010	Folha de polidimetilsiloxano (PDMS)
Brilho	Fisher Científico	#043204
Nunc 256665	Fisher Científico	#12-565-600	Placa de 96 poços sem fundo
Lenços umedecidos Kim	ULINE	S-8115
Limpador de plasma	Harrick Plasma	#PDC-001-HC
(3-aminopropil) trietoxissilano	Sigma-Aldrich	#440140	APTES
Papel pergaminho	Reynolds	N/A
Luz de teto	CCS inc	LFX2-100SW
Fonte de alimentação de luz de cúpula	CCS inc	PSB-1024VB
Unidade de iluminação difusa axial	siemens	Nerlite DOAL-75-LED	Luz axial difusa
Matriz de LED de alta potência	cree	XLamp CXA2540	Matriz de LED de alta potência
Suporte de LED	Molex	1807200001	Suporte de LED
Fonte de alimentação LED	Significa bem	HLG-320H-36B	Fonte de alimentação de corrente constante
Software FastCam Viewer	Photron		softeware câmera
Câmera Rápida Mini UX50	Photron	N/A	Câmera de alta velocidade
Micro-NIKKOR 105mm f/2.8	Nikon	#1455	Lente de câmera de alta velocidade
0,1 mg/ml de poli-L-ornitina	Sigma-Aldrich	#P4597
iCells	Dinâmica Celular Internacional	#NRC-100-010-001
Mídia iCell	Dinâmica Celular Internacional	#NRM-100-121-001
Suplemento iCell	Dinâmica Celular Internacional	#NRM-100-031-001
Laminina	Sigma-Aldrich	#L2020
atuador de bobina de voz	BEI Kimco	LA43-67-000A
Encoder linear óptico	Renishaw	T1031-30A
servoacionamento	Controles Copley	Xenus XTL
controlador	Instrumentos nacionais	Controlador PowerPC em tempo real cRIO 9024
Chassis cRIO	Instrumentos nacionais	cRIO 9113
módulo de entrada digital	Instrumentos nacionais	NI 9411
Chassi de aquisição de dados	Instrumentos nacionais	NI 9113
LabVIEW	Instrumentos nacionais
hiPSCNs	Dinâmica Celular Internacional