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Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Estabelecimento da neuropatia por resiniferatoxina (RTX)
CUIDADO: RTX é neurotóxico e perigoso. Em contato, atua como irritante para os olhos, membranas mucosas e trato respiratório superior. Evite a inalação e use óculos e jalecos de laboratório durante a preparação do RTX. Enxágue com água em abundância em caso de contato com a pele ou após o manuseio.
- Adicione 1 mg de pó RTX a uma mistura de 200 μL de igual volume de Tween 80 e etanol absoluto (100 μL para cada solvente).
- Alicote a solução RTX (12 μL/frasco) e armazene-a a -20 °C por até 3 meses. Isso constitui o estoque RTX; descarte a solução RTX restante no vencimento.
- Dilua o estoque RTX com solução salina normal até um volume final de 600 μL. A concentração final da solução RTX deve ser de 0,01%, o que equivale a 1 μg RTX em uma solução veicular de 10 μL.
- Use camundongos ICR machos adultos de 8 semanas de idade (35-40 g) como animais experimentais e administre uma dose única de solução RTX (dose: 200, 50 e 10 μg/kg, respectivamente) por via intraperitoneal (i.p.) com uma seringa de microinjeção aos camundongos. Os camundongos foram anestesiados por inalador com isoflurano a 5% para anestesia profunda. Se os camundongos mostraram ação de abstinência das extremidades durante a injeção de RTX, os camundongos devem demorar mais para inalar a anestesia.
Exemplo: Se o mouse pesar 40 g, ele receberá 20 μL da solução RTX, representando a dose de 50 μg/kg.
- Dê a um grupo de camundongos um volume igual de veículo (10% de Tween 80 e 10% de etanol absoluto em solução salina) como controle.
- Após a injeção de RTX, retorne os mouses a uma gaiola de plástico em um ciclo de 12 horas de luz / 12 horas de escuridão e forneça comida e água ad libitum.