Uma técnica para infligir lesão cerebral traumática de cabeça fechada em moscas Drosophila

Resumo

Fonte: Sun, M., et al. Um novo método para modelar a encefalopatia traumática crônica em Drosophila. J. Vis. Exp. (2017).

Este vídeo demonstra um procedimento para infligir uma lesão traumática de cabeça fechada em moscas Drosophila anestesiadas usando um dispositivo de ataque com um impactador movido a gás. A lesão afeta a função neuronal e prejudica a capacidade de caminhar.

Protocolo

1. Montagem do dispositivo de ataque (Figura 1)

1. Remova o êmbolo de uma seringa de tuberculina de 1 mL. Corte o barril na marca de 1 mL.
2. Remova uma barreira de aerossol (3 mm de altura x 4 mm de diâmetro) de uma ponta de pipeta de 200 μL e use-a como um impactor. Coloque o impactor dentro do corpo da seringa. Bata suavemente no cilindro para mover o impactor para a extremidade da ponta, com o lado plano cobrindo a abertura do bico.
3. Prenda a extremidade da ponta do barril a um tubo de plástico conectado ao regulador de fluxo de dióxido de carbono (CO₂) de uma estação de anestesia Drosophila.
4. Segure o cano verticalmente e prenda-o a um suporte de suporte de grampo padrão para que o pêndulo fique no fundo do cano.
5. Modifique uma ponta de pipeta de 200 μL para fazer o porta-moscas.
   1. Corte 4 mm da ponta para fazer uma abertura de 0,8 mm de diâmetro, permitindo que apenas a cabeça da mosca seja exposta.
      NOTA: O tórax e todas as outras partes do corpo da mosca ficarão dentro da ponta da pipeta.
6. Modifique uma ponta de pipeta de 1.000 μL e uma tampa de agulha de seringa de 1 mL para fazer o conector.
   1. Corte 44 mm da abertura da ponta. Pegue um comprimento de 6 mm de uma tampa de agulha de seringa de 1 mL e empurre-a firmemente no segmento restante da ponta da pipeta de 1.000 μL.

2. Operação do Dispositivo de Ataque

1. Anestesiar uma única mosca fêmea adulta de 2 dias usando CO₂ em uma almofada de mosca.
2. Transfira-o suavemente para o porta-moscas usando um pincel fino. Bata suavemente no suporte para que a cabeça da mosca seja vista fora da extremidade da ponta. Se a tromba da mosca estiver exposta fora da ponta, coloque-a suavemente de volta dentro da ponta com uma agulha de seringa embotada de 1 mL.
   nota: Certifique-se de manter a tromba dentro do suporte. Caso contrário, a mosca pode morrer de uma lesão por tromba sugadora.
3. Aperte o porta-moscas no corpo da seringa com o conector de forma que a cabeça da mosca fique voltada para baixo.
4. Ajuste a pressão do gás para 100 kPa. Ajuste a taxa de fluxo de acordo com o design do experimento.
5. Ligue e desligue rapidamente o interruptor de alternância do regulador de fluxo para que o impactor atinja a cabeça da mosca uma vez.
6. Levante o porta-moscas e mova-o sobre uma almofada de mosca. Inverta o porta-moscas e bata suavemente na lateral para deixá-la sair. Deixe a mosca em um frasco vazio para se recuperar.

Resultados

Figura 1. Diagrama do dispositivo de ataque. O dispositivo usou materiais que estão prontamente disponíveis em um laboratório de Drosophila: 1) ponta de pipeta de 200 μL, 2) seringa de tuberculina de 1 mL, 3) impactor, 4) tubo de conexão conectado a uma estação de anestesia de Drosophila e 5) conector para apertar a ponta na seringa.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Barreira de aerossol	EUA Científico	1120-8810	Usado como um impactor
Ponta de pipeta de 200 ul	EUA Científico	1111-0706	Usado como suporte de cabeça de mosca
Ponta de pipeta de 1000 ul	EUA Científico	1122-1830	Usado como um conector
Seringa de tuberculina de 1 ml	Becton Dickinson	309625
Placas de Petri de 60 mm	Fisher Científico	FB0875713A	Usado como arenas de rastreamento
Regulador de fluxo	Genesee Científico	59-122WC
Suporte/suporte de grampo padrão	EISCO Científico	CH0688
Pincel fino	Genesee Científico	Rolamento 59-204
Flypad	Genesee Científico	Rolamento 59-114