Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Modelo de camundongo de lesão cerebral neonatal HI
- Anestesie os filhotes com isoflurano.
- Coloque os filhotes (menos de 5) em uma caixa de anestesia e feche a tampa.
- Ligue o sistema de anestesia por aproximadamente 15 min; ajuste o gás e o isoflurano usando uma máquina de anestesia de mesa. Ajuste o medidor de vazão de oxigênio para 1.5 L/min. Ajuste o vaporizador de isoflurano para 3-5% para a indução da anestesia.
- Após 15 min, ajuste o vaporizador de isoflurano para 1-2% para a manutenção da anestesia.
- Coloque um filhote totalmente anestesiado sob um microscópio de dissecção (abdômen voltado para o pesquisador) e prenda-o com fita adesiva.
- Faça uma incisão de ~ 0,7 mm no pescoço usando uma tesoura esterilizada.
- Remova cuidadosamente o tecido adiposo com pinça esterilizada e exponha a artéria carótida direita unilateral.
- Ligue a artéria carótida direita unilateral com uma sutura absorvível 5-0.
- Suturar a incisão no pescoço com sutura 5-0.
- Coloque cada filhote em uma câmara hipóxica quente a 37 °C por 1 h para recuperação. Não feche a tampa da câmara.
- 1 h após a cirurgia, quando os filhotes estiverem totalmente acordados, feche a tampa da câmara de hipóxia e diminua os níveis de gases para estabelecer condições hipóxicas (8% O2 e 92% N2).
- Após 90 minutos de hipóxia, devolva os filhotes às suas gaiolas.
- Uma semana após a lesão cerebral HI, repita a etapa 1.
- Após a anestesia, fazer uma incisão no couro cabeludo com tesoura e fórceps esterilizados para identificar a lesão cerebral na área póstero-lateral do hemisfério direito.
nota: Este tratamento induz hipóxia em filhotes. A presença e extensão da lesão cerebral em todos os camundongos é avaliada visualmente a olho nu através do crânio semitransparente. Conforme determinado pelo tamanho ou volume da descoloração (ou seja, a lesão cerebral), os filhotes são classificados em grupos. Se não houver lesão cortical visível, o camundongo é classificado no grupo "sem lesão cortical". Se houver uma lesão cortical visível (ou seja, uma lesão no hemisfério direito), o camundongo é classificado no grupo de "lesão cortical". Como a classificação dos camundongos em grupos é feita uma semana após a operação, os agrupamentos podem ser modificados quando as morfologias das amostras cerebrais são claramente definidas no momento do sacrifício.
