Geração de um Modelo Murino com Infecção do Sistema Nervoso Central

Resumo

Fonte: Shen, T., et al. Um modelo murino de doença semelhante à encefalite viral aguda induzida pelo vírus da dengue. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo demonstra a geração de um modelo de camundongo com uma infecção do SNC. Um filhote de leite é injetado com o vírus tanto intracraniana quanto intraperitonealmente. O vírus se espalha, infectando o SNC, causando morte e inflamação das células neuronais. O filhote é avaliado quanto a sintomas de infecção à medida que a doença progride.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Procedimento de infecção

1. Prepare estoques não adaptados de DENV2 (cepa PL046)9 (originalmente obtidos dos Centros de Controle de Doenças em Taiwan, variando de 2,5 x 10⁷ a 1 x 10⁹ PFU/mL).
2. Dilua o estoque de vírus para 1 x 10⁶ PFU com o meio Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 para um volume total de 40 μL.
3. Encha uma seringa de 0,3 ml com uma agulha de 30 G com 10 μL (2,5 x 10⁵ PFU) de vírus diluído e encha outra seringa de 0,3 ml com uma agulha de 30 G com 30 μL (7,5 x 10⁵ PFU) de vírus diluído.
4. Segure o camundongo lactante ICR (Institute of Cancer Research) de 7 dias e execute as etapas a seguir.
   1. Para a injeção intracerebral, segure o camundongo em decúbito ventral pressionando a aurícula entre o dedo indicador e o polegar e injete intracerebralmente 10 μL de vírus diluído na área lambda, o ponto na interseção da sutura sagital e lambdoide.
   2. Após a injeção intracerebral, segure o camundongo em decúbito dorsal usando o dedo indicador e o polegar e injete suavemente 30 μL de vírus diluído por via intraperitoneal no abdome murino.
      nota: Para evitar o canibalismo, o álcool 75% é usado para criar uma perda temporária da sensação olfativa da mãe. Além disso, sugere-se cobrir a ninhada com fezes e urina da mãe.
5. Deite os camundongos lactentes de volta em suas gaiolas e aguarde 5 minutos para verificar sua segurança pós-estimulação com a avidez dos camundongos, incluindo caminhada e sucção do leite materno.
   nota: Na maioria das vezes, os camundongos demonstram atividade normal pós-estimulação e não parece haver nenhum efeito prejudicial após o desafio técnico.
6. Avaliar o progresso diário dos ratinhos em termos de peso corporal (utilizando uma balança de microgramas), doença aguda do tipo encefalite viral (através da pontuação da doença, conforme descrito na secção 2) e taxa de sobrevivência.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Instituto Memorial de Roswell Park 1640 médio (RPMI)	Gibco	11875-085	Vírus diluído
Seringa de insulina de 0,3 mL	BD Ultra-FineII	328838	Injeção intracerebral e intraperitoneal
Microbalança	LabX da METTLER TOLEDO	AL104	Peso do mouse
DENV2 não adaptado (cepa PL046)	Os Centros de Controle de Doenças de Taiwan	-	Infectar rato
Instituto de Pesquisa do Câncer (ICR) camundongo lactante	BioLASCO Taiwan Co., Ltd	-	Nosso modelo murino