Indução de encefalomielite autoimune experimental em modelo de camundongo

Abstract

Fonte: Schmitz, K., et al. Bioluminescência e imagem de infravermelho próximo de neurite óptica e inflamação cerebral no modelo EAE de esclerose múltipla em camundongos. J. Vis. Exp (2017).

Neste vídeo, um modelo de camundongo com esclerose múltipla é estabelecido usando encefalomielite autoimune experimental (EAE). O camundongo é injetado com uma emulsão contendo um peptídeo neuronal e um adjuvante, desencadeando uma resposta imune que ativa as células T autorreativas. Isso é seguido por uma injeção de toxina coqueluche (PTX) para aumentar a permeabilidade da barreira hematoencefálica, permitindo que as células T autorreativas se infiltrem no cérebro. Essa infiltração inicia uma cascata de sinalização que resulta em danos à mielina, imitando a condição desmielinizante da esclerose múltipla.

Protocol

1. Indução EAE em camundongos SJL/J

1. mouses
   1. Use camundongos SJL / J fêmeas de 11 semanas de idade e deixe-os se habituar à sala experimental por cerca de 7 dias. Use n = 10 camundongos por grupo.
   2. Para avaliar os efeitos da medicação, administre continuamente o medicamento e o placebo para o grupo controle por meio de água potável ou pellets de alimentos a partir de 3 ou 5 dias após a imunização (n = 10 por grupo). Durante o pico da doença, administre medicamentos ou placebo com leite ou flocos de milho embebidos em água com açúcar a 3%.
2. Material de imunização
   1. Use um kit de indução EAE consistindo de antígeno (peptídeo da proteína proteolipídica, PLP139-151, emulsão de 1 mg / mL) em uma emulsão com adjuvante de Freund completo (CFA, Mycobacterium tuberculosis H37 Ra morto pelo calor) e 2 frascos (5 μg cada) de toxina coqueluche liofilizada (PTX).
   2. Dissolva o PTX (2 μg/mL) em 1x solução salina tamponada com fosfato (PBS, ou seja, adicione 1,5 mL de PBS a cada tubo PTX, misture bem, remova com a mesma ponta da pipeta e adicione a 1 mL de PBS em um tubo de 50 mL); misture bem.
3. imunização
   1. Injetar PLP/CFA por via subcutânea em 2 porções, cada uma com 100 μL, ambas na base da cauda.
   2. Injete 100 μL de PTX por via intraperitoneal (i.p.) duas vezes por camundongo, a primeira 1 a 2 h após a imunização e a segunda em 24 h.
   3. Para os camundongos controle, injete CFA sem PLP (2 porções de 100 μL) mais PTX sem PLP.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Emulsão PLP139-151/CFA	Hooke Labs, São Lourenço, MA	EK-0123	Kit de indução EAE
Toxina da coqueluche	Hooke Labs, São Lourenço, MA	EK-0123	Kit de indução EAE
Espectro IVIS Lumina	Perkin Elmer, Inc., Waltham, EUA		Sistema de Bioluminescência e Imagem Infravermelha
Software LivingImage 4.5	Perkin Elmer, Inc., Waltham, EUA	CLS136334	Software de análise IVIS
Isoflurano	Abbott Labs, Illinois, EUA	Rolamento 26675-46-7	anestésico