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Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Cuidados com os animais
- Use camundongos C57BL / 6J machos de 5 a 6 semanas de idade (20-25 g de peso) neste experimento.
- Mantenha os ratos em um ciclo claro/escuro de 12 h/12 h e certifique-se de que eles recebam comida e água ad libitum. Forneça as mesmas quantidades de comida e água para os grupos simulado e TCE durante todo o estudo.
- Faça todos os esforços para minimizar a dor e o desconforto do animal.
2. Indução de traumatismo cranioencefálico
- Injete cetamina (80-100 mg / kg) / xilazina (10 mg / kg) IP para anestesia. Teste a profundidade da anestesia usando um reflexo ocular ou reflexo da dor. Use lágrimas artificiais ou pomada lubrificante para os olhos para evitar que os olhos sequem.
- Após a anestesia, coloque o mouse em decúbito ventral. Use uma almofada de aquecimento com temperatura controlada para manter a temperatura a 37 °C durante a cirurgia e por 30 min após o TCE.
- Raspe o cabelo da área da incisão.
- Desinfete o couro cabeludo com etanol a 70% usando três esfoliações alternadas e, em seguida, faça uma incisão no couro cabeludo em um plano sagital.
- Use uma pinça para retrair a incisão em ambos os lados e separar ligeiramente o periósteo.
- Use um marcador para desenhar um círculo (3 mm de diâmetro) na área parietal direita do crânio, a 2 mm de distância da linha média.
- Perfure o crânio com uma furadeira elétrica. Certifique-se de que esta etapa seja operada com cuidado para proteger a dura-máter de danos.
- Remova o retalho ósseo e exponha uma pequena janela óssea (3 mm de diâmetro).
- Coloque uma cânula plástica de lesão (diâmetro interno = 2,5 mm, comprimento = 8 mm) sobre a craniotomia e cimente a cânula no crânio usando um acrílico dentário.
- Encha a cânula com NaCl estéril a 0,9% (solução salina normal) usando uma seringa (5 mL) para garantir que não haja bolhas na cânula.
- Ligue o osciloscópio e amplifier e certifique-se de que o tubo de alta pressão do dispositivo LFPI esteja livre de bolhas de ar. Teste o dispositivo fornecendo cerca de 10 pulsos até que ele emita um sinal constante. Ajuste o ângulo da posição inicial do pêndulo para atingir uma intensidade de pulso de cerca de 2,0 atm.
- Conecte a cânula de lesão ao dispositivo LFPI. Induza lesão cerebral puxando o gatilho e soltando o pêndulo. Em seguida, obtenha um pulso e transmita-o para a dura-máter através de todo o sistema fechado de tubulação cheia de fluido.
- Opere os camundongos no grupo simulado com o mesmo procedimento cirúrgico. Não execute o LFPI.