Indução mediada por Cre-LoxP de malformações cavernosas cerebrais em um modelo de camundongo

Resumo

Fonte: Choi, J. P., et al. Indução e micro-TC de malformações cavernosas cerebrais em modelo de camundongo. J. Vis. Exp. (2017)

Neste vídeo, um filhote de camundongo geneticamente modificado carregando o gene Ccm2 ladeado por locais loxP e Cre recombinase fundidos a um receptor de estrogênio é usado para induzir malformações cavernosas cerebrais (CCMs). A administração de 4-hidroxitamoxifeno ativa o Cre nas células endoteliais, levando à deleção de Ccm2 e à formação de CCMs no cérebro.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Indução de Malformações Cavernosas Cerebrais ou CCMs em Modelos de Camundongos

1. Cruz Cdh5-CreErt2; camundongos Ccm2fl/fl com Ccm2fl/fl para gerar ninhadas com Cdh5-CreErt2; Ccm2fl/fl (Ccm2iECKO) filhotes e controles de ninhada (Ccm2fl/fl). Animais Cdh5-CreErt2 e Ccm2fl/fl foram descritos anteriormente19.
2. Dissolver o 4HT em etanol a 100% e conservar a -80 °C em alíquotas de 30 μL de 4-hidroxitamoxifeno (4HT) (concentração: 10 mg/ml). No dia do uso, diluir o 4HT aliquotado em óleo de milho (0,5 mg/mL).
3. Injete intragástrico 50 μL de 4HT (0,5 mg/mL) em filhotes neonatais em P1 para induzir lesões experimentais de CCM usando uma seringa de insulina.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
4-hidroxi tamoxifeno	Sigma-Aldrich	H6278	Para ativar o Cdh5-CreErt2
Óleo de milho	Sigma-Aldrich	C8267-500ML	Para diluir o 4-hidroxi tamoxifeno
Seringa de insulina