Indução de uma hemorragia subaracnóidea em um modelo de camundongo por meio de perfuração endovascular

Resumo

Fonte: Liu, S., et al. Modelo de perfuração endovascular para hemorragia subaracnóidea combinada com ressonância magnética (MRI).J. Vis. Exp. (2021).

O vídeo demonstra a indução de hemorragia subaracnóidea por perfuração endovascular em um modelo de camundongo. Uma incisão é feita na região do pescoço do camundongo anestesiado para acessar a artéria carótida comum e sua bifurcação. Um filamento é inserido através das artérias para perfurar um ramo da artéria intracraniana, induzindo hemorragia subaracnoide.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Preparação dos animais

1. Induza a anestesia injetando cetamina (70 mg/kg) e xilazina (16 mg/kg) por via intraperitoneal. Manter a temperatura corporal normal, contribuindo para a rápida indução da anestesia profunda. Teste a sedação adequada com um estímulo de dor, como uma pinça no dedo do pé, e verifique a ausência de reação.
2. Raspe cuidadosamente os pelos do pescoço do camundongo com uma navalha, limpe-o com etanol a 70% seguido de betadina/clorexidina e aplique lidocaína a 1% na superfície da pele para controle local da dor.
3. Coloque o mouse em decúbito dorsal. Use fita adesiva para fixar os membros e a cauda, esticando suavemente a pele do pescoço para o lado oposto da cirurgia. Simultaneamente, eleve ligeiramente o pescoço.
4. Use pomada oftálmica (por exemplo, dexpantenol a 5%) para evitar a desidratação dos olhos durante a operação.

2. Indução de HAS

1. Abra a pele do pescoço com um bisturi estéril, do queixo até a borda superior do esterno (1,5 cm), e separe as glândulas salivares do tecido conjuntivo circundante.
2. Separe o grupo muscular ao longo de um lado [neste caso, o lado direito] da traqueia, expondo a bainha da artéria carótida comum (CCA) coberta com vasos sanguíneos nutritivos e vênulas. O CCA e os nervos estão localizados próximos um do outro.
3. Dissocie o CCA e deixe um 8-0 livre sutura de seda ao redor do CCA sem ligá-lo previamente. Preste atenção à proteção do nervo vago, pois ele é facilmente danificado (Figura 1A).
4. Uma bifurcação tripla da ACC, da artéria carótida interna (ACI) e da artéria carótida externa (ACE) é visível ao longo do terço posterior inferior da diástase. Dissecar a extremidade distal do ECA e ligar o vaso duas vezes mais longe possível.
5. Desconecte o ECA no ponto médio do segmento duplamente ligado, criando um coto de vaso.
6. Pré-arranje uma ligação para o filamento ao redor do coto ECA, não feche-o até a inserção bem-sucedida do filamento.
7. Use uma sutura ou microclipe para ocluir a ACI e a ACC temporariamente (Figura 1B).
8. Faça uma pequena incisão (aproximadamente metade do diâmetro da ECA) na ECA usando uma tesoura microvascular. Insira um filamento de prolene 5-0 (alternativamente 4-0) no ECA e avance-o para o CCA.
9. Feche ligeiramente a ligadura no ECA enquanto afrouxa o micro clipe no ICA e no CCA (Figura 1C).
10. Puxe suavemente o filamento para trás e ajuste o coto ECA na direção cranial, invaginando o filamento através da bifurcação na ACI (Figura 1D).
11. Aponte a ponta do filamento medialmente em um ângulo de ~30° em relação à linha média traqueal e ~30° em relação ao plano horizontal. Empurre o filamento para frente dentro do ICA. Depois de atingir a bifurcação da artéria cerebral anterior (ACA) - artéria cerebral média (MCA), a resistência é encontrada (~ 9 mm).
12. Avance o filamento 3 mm mais, perfurando o ACA direito. Retire imediatamente o filamento para o coto ECA, permitindo o fluxo sanguíneo para o espaço subaracnóideo.
13. Mantenha o filamento nesta posição por cerca de 10 s (Figura 1E). A presença de tremores musculares, miose ipsilateral, respiração ofegante, ritmo cardíaco alterado e incontinência urinária podem ser evidências de sucesso da cirurgia.
14. Feche temporariamente o CCA para evitar perda excessiva de sangue. Retire o filamento instantaneamente e ligue o ECA com a sutura pré-arranjada. Reabra a ACC e permita a reperfusão e posterior derrame de sangue para o espaço subaracnóideo (Figura 1F).
15. Depois de verificar se há vazamento de sangramento, desinfete a pele ao redor da ferida para evitar infecções de pele pós-operatórias e suture a ferida com uma sutura de fibra de poliéster 4-0 não absorvível.
16. Coloque o mouse em uma caixa térmica até que a consciência seja recuperada. Espere até que o animal esteja totalmente acordado e certifique-se de que recuperou a consciência suficiente para manter a decúbito esternal. Não devolva os animais à companhia de outros ratos até que estejam totalmente recuperados.
17. Administre 200-300 mg/kg de paracetamol de peso corporal para alívio da dor pós-operatória.
18. Verifique os ratos diariamente após a cirurgia.

Resultados

Figura 1: Imagens passo a passo da técnica cirúrgica.(A) Representação da anatomia da artéria carótida direita exposta: identifica-se a ACC e sua bifurcação em ACI e FEC, bem como os pequenos ramos da ACE (OA e STA). (B) O ECA é mobilizado do tecido circundante e ligado com duas suturas antes de cortá-lo. Uma terceira ligadura precisa ser colocada frouxamente perto d...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Creme para os olhos	Bayer	815529836	Bepanthen
Sutura de ligadura (5-0)	Smi		Preto de seda USP
Fonte luminosa para o microscópio	Zeiss	LED CL 6000
Cetamina	CP-pharma	Rolamento 797-037	100 mg/ml
Paracetamol (40 mg/mL)	bene Arzneimittel	4993736
Filamento de prolene (5-0)	Erhicon	EH7255
navalha	Wella	HS61
Instrumento cirúrgico (tesoura fina)	Festa	14060-09
Instrumento cirúrgico (fórceps#1)	ESCULPO	FM001R
Instrumento cirúrgico (fórceps#2)	ESCULPO	FD2855R
Instrumento cirúrgico (fórceps#3)	Hammacher	HCS 082-12
Instrumento cirúrgico (porta-agulhas)	Festa	Rolamento 91201-13
Instrumento cirúrgico (tesoura de mola Vannas)	Festa	15000-08
Microscópio cirúrgico	Zeiss	Stemi 2000 C
Sutura de ferimento(4-0)	Erhicon	CB84D
Xylavet	CP-pharma	Rolamento 797-062	20 mg/ml