Microdiálise de fluido intersticial de um cérebro de camundongo para isolar proteínas extracelulares

Resumo

Fonte: Yamada, K. Método de microdiálise in vivo para coletar grandes proteínas extracelulares do fluido intersticial cerebral com sondas de corte de alto peso molecular. J. Vis. Exp. (2018)

O vídeo demonstra o processo de uso de uma sonda de microdiálise para coletar proteínas extracelulares do fluido intersticial (ISF) do cérebro de um camundongo. Uma sonda de microdiálise, equipada com uma membrana semipermeável de corte de alto peso molecular, é inserida no cérebro de um camundongo anestesiado por meio de uma cânula guia implantada. A sonda, conectada a bombas, permite que um tampão fisiológico perfunda o tecido cerebral e se misture com o ISF. As proteínas do FSI se difundem através da membrana semipermeável e são coletadas para análise.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Procedimento pré-cirúrgico

1. Antes de iniciar a cirurgia, limpe tudo com etanol a 70% para manter as condições estéreis. Recomenda-se o suporte térmico usando uma almofada de aquecimento.
2. Anestesiar os camundongos por injeção intraperitoneal de hidrato de cloral (400 mg / kg). Confirme a anestesia realizando uma pinça no dedo do pé. Recomenda-se o uso de meloxicam SR na indução e buprenorfina após a recuperação BID (....

Resultados

Figura 1: Configuração da cirurgia e construção de circuitos de microdiálise. (UMA) Configure um conjunto estereotáxico para um implante de guia usando uma porca de capa, um adaptador estereotáxico e uma cânula guia. (B) Cirurgia estereotáxica para implantar uma cânula guia. A cânula guia é inserida no cérebro a 12 graus em relação à vertical. (C) Construção de uma t.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
O Microsampler Univentor 820	Univentor	8303002	Coletor de frações refrigeradas
Bomba de seringa	KD científico	KDS-101
Bomba de rolo	Microdiálise da Eicom	ERP-10
Sistema autônomo Raturn	BASi	MD-1409	Sistema de movimentação livre
Kit de gaiola de duas espécies	BASi	CX-1600
Sonda de microdiálise AtmosLM (comprimento do eixo 8 mm, comprimento da membrana 2 mm)	Eicom microdiálise	PEP-8-02	O comprimento do eixo de uma sonda, uma guia, uma sonda dumática e um adaptador estereotáxico deve ser idêntico.
Guia de microdiálise (comprimento do eixo 8 mm)	Microdiálise da Eicom	PEG-8
Sonda fictícia para microdiálise (comprimento do eixo 8 mm)	Microdiálise da Eicom	PED-8
Parafuso ósseo	BASi	MD-1310
Conjunto Super bond C&B	Sunmedical		Cimento dentário
Instrumento estereotáxico para animais de pequeno porte com console de exibição digital	Kopf	Modelo 940	Aparelho estereotáxico
Adaptador de camundongo e rato neonatal	Stoelting	51625
Barras auriculares padrão e pontas de borracha para estereotáxico de mouse	Stoelting	51648
Solução de albumina de soro bovino	Sigma	A7284-50ML	Solução BSA de 30%
Tubo FEP (70 cm)	Microdiálise da Eicom	JF-10-70	Volume interno = 0,5 μL/cm
Tubo de teflon (50 cm)	Microdiálise da Eicom	JT-10-50	Volume interno = 0,08 μL/cm
Tubo de Byton	Microdiálise Eicom	JB-30
Adaptador de facada luer intramédico 23G	BD	427565	Agulha de ponta romba
Tubo de rolo	Microdiálise da Eicom	RT-5S	Volume interno = 4 μL
Porca de capa	Microdiálise Eicom	AC-5
Tubo de microcentrífuga de 0,25 mL com tampa	QSP	503-Q	Tubos para coletor de frações
Adaptador estereotáxico (comprimento do eixo 8 mm)	Microdiálise da Eicom	PESG-8
Agulha de conexão	Microdiálise da Eicom	RTJ
Coleira de animais de rato	BASi	MD-1365
Kit de micromotor rotativo de alta velocidade	FOREDOM	K.1070	Perfuração
Picrotoxina	Sigma	Pág. 1675
Chave de fenda para parafusos ósseos
Bisturi
Cotonete
Máquina de tosquiar cirúrgica