Teste de escada para avaliação da função motora em um rato hemiparkinsoniano

Resumo

Fonte: Rattka, M, et al., Uma nova abordagem para avaliar o resultado motor dos efeitos da estimulação cerebral profunda no rato hemiparkinsoniano: teste de escada e cilindro. J. Vis. Exp. (2016).

Este vídeo demonstra o teste da escada para avaliar a função motora em um rato hemiparkinsoniano com lesão cerebral direita. A lesão interrompe a sinalização da dopamina, prejudicando o controle da pata esquerda, o que resulta em mais pellets remanescentes nas escadas esquerdas, indicando disfunção motora.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Teste de escada (Figura 1)

1. Fase de aquisição
   1. Um dia antes do treinamento, familiarizar os animais com os pellets usados no teste da escada.
      1. Opcional: Para aumentar a motivação do animal, use uma restrição alimentar (10-15 g de ração de laboratório padrão para manter o peso corporal em 90% do nível de alimentação livre). No entanto, isso não é obrigatório para obter um efeito de treinamento positivo. Este estudo foi realizado sem restrição alimentar.
   2. Prepare uma caixa de escada de vidro transparente (altura: 34,5 cm, comprimento: 35,5 cm, largura: 12 cm e compartimento estreito de 6 cm) limpando a caixa com uma solução de ácido acético a 0,1%. NOTA: A caixa da escada é uma caixa de dois compartimentos com uma plataforma elevada e duas escadas no compartimento estreito. Os degraus da esquerda nas escadas do compartimento estreito podem ser alcançados apenas com a pata esquerda e os degraus da direita apenas com a pata direita.
      NOTA: As caixas de escada padrão consistem em dois compartimentos com tampa. Se forem usados para experimentos com ratos estimulados por cabo, use uma caixa alta sem tampa.
   3. Remova a escada e encha os poços em cada degrau com oito pastilhas de 45 mg.
   4. Insira a escada e coloque oito pellets adicionais na plataforma elevada.
   5. Coloque o rato na caixa de transporte.
   6. Transporte o rato da gaiola doméstica para a caixa da escada usando a caixa de transporte.
   7. Coloque o rato na caixa da escada (Figura 2).
   8. Após cinco minutos, retire o animal da caixa da escada e coloque-o de volta na gaiola de casa usando a caixa de transporte.
   9. Observe quantos pellets foram comidos da plataforma e (eventualmente) das escadas direita e esquerda.
   10. Reabasteça a escada enchendo os poços em cada degrau com oito pastilhas de 45 mg.
   11. Limpe a caixa da escada com uma solução de ácido acético a 0,1% e coloque os pellets adicionais na plataforma.
   12. Repita este procedimento (fase de aquisição) três dias seguidos.
       NOTA: Todos os experimentos descritos foram realizados em ratos Sprague Dawley machos. A duração dos diferentes módulos de treinamento pode diferir em ratos de diferentes linhagens, sexos e vendedores.
2. Teste de livre escolha
   1. Limpe a caixa da escada com uma solução de ácido acético a 0,1%.
   2. Remova a escada e encha os poços em cada degrau com oito pastilhas de 45 mg.
   3. Coloque o rato na caixa de transporte.
   4. Transporte o rato da gaiola doméstica para a caixa da escada usando a caixa de transporte.
   5. Coloque o rato na caixa da escada.
   6. Após cinco minutos, retire o animal da caixa da escada e coloque-o de volta na gaiola de casa usando a caixa de transporte.
      Observe quantos pellets foram comidos da escada direita e esquerda.
   7. NOTA: Se os animais ainda tiverem problemas para agarrar pellets, adicione mais alguns na plataforma onde possam ser facilmente alcançados.
   8. Reabasteça a escada enchendo os poços em cada degrau com oito pastilhas de 45 mg.
   9. Limpe a caixa da escada com uma solução de ácido acético a 0,1% para o próximo animal.
   10. Repita este procedimento (fase de livre escolha) três dias seguidos.
       NOTA: Os resultados apresentados foram obtidos por meio de treinamento realizado sem período de descanso entre os módulos. Alguns grupos preferem um dia de descanso para consolidação, para apoiar o processo de treinamento.
3. Teste de escolha forçada
   1. Limpe a caixa da escada com uma solução de ácido acético a 0,1%.
   2. Remova a escada e encha os poços em cada degrau da escada esquerda com oito (primeiros três dias do módulo) ou quatro (três dias consecutivos do módulo) pellets de 45 mg.
      1. Realize o teste de escolha forçada no lado, onde ocorrerá a deficiência.
         NOTA: Realizamos a lesão de Parkinson no hemisfério direito e, portanto, treinamos seletivamente a pata esquerda.
   3. Coloque o rato na caixa de transporte.
   4. Transporte o rato da gaiola doméstica para a caixa da escada usando a caixa de transporte.
   5. Coloque o rato na caixa da escada.
   6. Após cinco minutos, retire o animal da caixa da escada e coloque-o de volta na gaiola de casa usando a caixa de transporte.
   7. Observe quantos pellets foram comidos da escada esquerda.
   8. Reabasteça a escada enchendo os poços em cada degrau com oito ou quatro pellets de 45 mg (o número de pellets depende do dia de treinamento).
   9. Limpe a caixa da escada com uma solução de ácido acético a 0,1% para o próximo animal.
   10. Repita este procedimento (fase de escolha forçada) seis dias seguidos.
4. Aquisição de dados
   1. Realize o experimento conforme descrito para o módulo de escolha forçada (quatro pellets em cada poço na escada esquerda) em dois dias consecutivos. Calcule a taxa de sucesso (número de pellets ingeridos) como uma média dos dois dias.

Resultados

Figura 1: Configuração de teste de escada. A caixa da escada disposta com pellets na escada esquerda. (A) vista lateral, (B) vista de cima.

Figura 2: Teste de escada. Um rato hemiparkinsoniano durante o teste da escada.

(N...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Caixa de escada sem tampa	Glas Keil, Alemanha		feito sob medida
Pellets de precisão sem poeira, 45 mg	Bio Serv	F0021