Denervação simpática de artérias renais em um modelo de camundongo com hipertensão induzida por angiotensina II

Neste artigo

Resumo

Fonte: Wang, M., et al., Hipertensão Mitigada de Denervação Renal Melhorada Induzida pela Infusão de Angiotensina II. J. Vis. Exp. (2022)

Este vídeo demonstra um procedimento para denervação simpática da artéria renal em um modelo de camundongo hipertenso induzido por angiotensina II, usando fenol para interromper a função nervosa simpática e reduzir a pressão arterial.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Denervação renal bilateral

Selecione os camundongos com pressão arterial (PA) elevada ≥140/90mmHg ou aumento de 25% na PA sistólica/PA diastólica, 1 semana após a infusão de Ang II.
Registre o peso do animal antes da cirurgia e escolha animais com peso mínimo de 24 g para cirurgia de denervação renal.
Anestesiar os camundongos com pentobarbital sódico. Confirme a profundidade da anestesia com um reflexo negativo de pinça do dedo do pé.
Remova os pelos do abdômen com um barbeador. Realize este procedimento com cuidado e minuciosamente para evitar qualquer contaminação cirúrgica.
Coloque os ratos na mesa de operação, mantendo o abdômen para cima, e fixe seus membros com fita adesiva. Desinfetar a pele abdominal com iodopovidona, seguido de três toalhetes com etanol a 70%.
Faça uma incisão abdominal na linha média ventral de 2 cm usando uma lâmina de bisturi. Puxe o intestino para trás com gaze embebida em solução salina a 37 °C para expor a artéria renal esquerda. Dissecar com cuidado, mas sem rodeios, a gordura da artéria renal usando uma pinça curva. (Figura 1A-C).
Corte o papel de pesagem em um retângulo do mesmo tamanho da artéria renal com uma tesoura afiada e estéril. Para referência, corte o papel de pesagem no mesmo tamanho mostrado pela linha pontilhada em Figura 1C.
NOTA: É uma parte crítica da cirurgia tentar cortar vários pedaços do papel de pesagem de cada vez para manter a mesma forma.
Mergulhe o papel de pesagem em uma solução de fenol/etanol a 10% por pelo menos 30 s. Cobrir a superfície da artéria renal esquerda e envolver o recipiente com o papel de pesagem, mantendo-o durante 2 min (Figura 1D). Use gaze para proteger os tecidos circundantes para evitar que o papel de pesagem toque o rim e o intestino circundantes.
NOTA: A solução de fenol é estável em tubos de plástico, mas não em frascos de vidro. Portanto, a solução deve ser preparada para cada experimento.
Realize o mesmo procedimento para a artéria renal direita. Realize a cirurgia simulada com papel de pesagem imerso em solução salina.
Reposicione os músculos em sua posição inicial e feche o peritônio com pontos de Vicryl 6-0 em uma sutura interrompida. Em seguida, feche a pele com pontos de náilon 4-0 interrompidos. Monitore todos os ratos até que estejam totalmente recuperados.

2. Cuidados pós-operatórios

Aplique iodopovidona na incisão e coloque o animal em um cobertor elétrico aquecido para recuperação e monitoramento pós-operatório.
Monitore os camundongos duas vezes ao dia para avaliar vermelhidão, inchaço e dor ou infecção abdominal. Fornecer meloxicam (0,5 mg/kg, SC) a todos os ratinhos cerca de 1 h antes e 24 h após o procedimento RDN.

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Resultados

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Figura 1: Procedimento de RDN com papel de pesagem. (A,B) Imagens anatômicas da artéria renal de camundongos C57BL/6 (ex vivo). (C) A parte dentro das duas linhas pontilhadas refere-se à área coberta pelo papel de pesagem. (D) Cobrir a superfície da artéria renal bilateral com o papel de pesagem apropriado imerso em solução de fenol/etanol ...