Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.
1. Estabelecimento de um modelo unilateral de oclusão/reperfusão da artéria cerebral média (MCAO/R) em ratos
NOTA: Durante a operação, use as micropinças suavemente para evitar a ruptura do vaso sanguíneo. Evite danos aos nervos e outros vasos sanguíneos no colo do rato quando o vaso estiver isolado. Deve-se tomar cuidado para apresentar uma técnica asséptica apropriada para todos os procedimentos cirúrgicos de sobrevivência. A técnica ilustrada mais adiante no vídeo deve ser praticada durante todo o procedimento.
- Durante toda a cirurgia, manter a temperatura corporal dos ratos em 37,0 ± 0,5 °C em um termostato de pequenos animais. Prepare quatro suturas de 6 cm 5-0.
- Defina a taxa de fluxo de oxigênio de uma máquina de anestesia para pequenos animais (com um dispositivo de tratamento de gases residuais) em 0.4−0.6 L/min e a concentração de isoflurano em 5%. Coloque o rato na máquina de anestesia.
- Depois que o animal desmaiar, coloque o rato em uma mesa de fixação cirúrgica. Conecte a boca do rato à máscara da máquina de anestesia (a taxa de fluxo de oxigênio permanece inalterada; ajuste a concentração de isoflurano para 3%). Confirme se o animal entrou em anestesia profunda, observando a falta de tensão nas extremidades, reflexos da córnea e dor.
- Fixe seus membros para ficarem na mesa de operação com bandagens de papel (ou outras ferramentas).
- Remova o casaco do pescoço com um barbeador elétrico e esterilize com álcool 75% (iodóforo é melhor). Fixe a boca do rato com um gancho.
- Corte 2−3 cm ao longo da forma longitudinal central do pescoço com uma tesoura oftálmica.
- Separe a artéria carótida comum. Separe o músculo subcutâneo com uma pinça oftálmica. Use um afastador caseiro para expor totalmente o campo de visão. Depois de separar o músculo anterior da traqueia com uma pinça oftálmica, separe ao longo do tendão esternocleidomastóideo direito até que a artéria carótida comum esteja visível.
- Isole a artéria carótida comum, a artéria carótida externa e a artéria carótida interna com uma pinça oftálmica. Ligue a artéria carótida comum (nó duro), a artéria carótida externa longe da extremidade do coração (nó duro) e a artéria carótida interna (nó solto) com suturas 5-0. Forre a artéria carótida externa perto da extremidade do coração com suturas 5-0.
- Insira um parafuso de rosca. Corte uma pequena abertura na artéria carótida externa usando uma tesoura oftálmica e insira suavemente um parafuso de rosca. Ligue a sutura da artéria carótida externa que está em um nó solto e corte a artéria carótida externa.
- Afrouxe o nó solto da artéria carótida interna e continue inserindo o parafuso de rosca no início da artéria cerebral média (sutura marcada). Em seguida, corte o parafuso de rosca exposto.
- Após o tempo isquêmico ser atingido (2-3 h), fixe a fratura da artéria carótida externa com uma micropinça e puxe suavemente o parafuso de rosca com outra micropinça. Quando a extremidade frontal do parafuso de rosca estiver completamente retirada da artéria carótida interna, ligue a artéria carótida externa que foi revestida com suturas 5-0 e, em seguida, puxe o parafuso de rosca completamente.
- Afrouxe a artéria carótida comum e aplique ~ 50.000 U de penicilina sódica em pó na superfície da ferida para evitar infecções. Sutura dos músculos subcutâneos e pele com 4 suturas.
- Dê ~ 0,2 mL de solução salina estéril ao rato por via oral usando uma seringa de 1 mL (a injeção de SQ-PEN é melhor) para evitar a falta de água pós-operatória após colocar o rato de volta na gaiola.