Avaliando a contração muscular com tratamento com bloqueadores neuromusculares

Resumo

Fonte: Lin, C. U., et al., Junção Neuromuscular In Vitro Induzida a Partir de Células-Tronco Pluripotentes Induzidas por Humanos. J. Vis. Exp. (2020)

Este vídeo demonstra a avaliação do músculo usando neurônios motores cultivados, células de Schwann e miotubos, seguido de tratamento com um bloqueador neuromuscular para inibir a contração. Gráficos de movimento de tempo codificados por cores mostram um gráfico de movimento de tempo codificado por cores. Vermelho indica o movimento mais rápido e azul indica o mais lento.

Protocolo

1. Contração muscular e tratamento curare

1. Para desencadear a contração do miotubo, adicione 25 mM de cloreto de cálcio (CaCl₂) ao meio de cultura. O movimento dos miotubos pode ser observado em 1\u20122 min.
2. Coloque a placa de 6 poços no palco de um microscópio invertido. Gravar um filme de contração do miotubo por microscopia de células vivas.
3. Para interromper a contração do miotubo, adicione curare ao meio de cultura (300 ng/mL). Em seguida, grave o filme como passo 1.2.
4. Abra o arquivo de filme com o software de análise vetorial de movimento e clique no botão Análise de Movimento para analisar o filme.
   NOTA: A contração dos miotubos é mostrada como gráfico de tempo-movimento. Os filmes são codificados por cores para mostrar a velocidade de movimento dos miotubos. Os sinais brilhantes codificados por cores indicam os movimentos dos miotubos, onde a cor vermelha mostra a velocidade de movimento mais rápida e a cor azul mostra a velocidade de movimento mais lenta.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Meio, fatores de crescimento e reagentes	Item	Marca	Gato. Número
	B27, Gibco	Gibco	12587-001
	BDNF	Sistemas de P&D	248-BD
	ECM, Matrigel (fator de crescimento reduzido)	Corning	356230
	GDNF	Sistemas de P&D	212-GD
	Revestidor de íons	JEOL	JEC3000FC
	Microscopia de células vivas	Nikon	Microscópio Eclipse Ti
	Software de análise vetorial de movimento	Sony	SI8000
	N2, Gibco	Gibco	17502-048
	Meio neurobasal	Gibco	21103-049
	NT3	Sistemas de P&D	267-N3