Induzindo AVC trombótico por hipóxia e isquemia em um modelo de camundongo

Resumo

Fonte: Sun, Y. Y., et al., Um modelo de AVC trombótico baseado em hipóxia-isquemia cerebral transitória. J. Vis. Exp. (2015).'

Este vídeo demonstra o procedimento de replicação de um acidente vascular cerebral trombótico em um modelo de camundongo, bloqueando a artéria carótida comum direita e expondo o camundongo a um ambiente com baixo teor de oxigênio. Esse processo reduz o fluxo de sangue e oxigênio para o cérebro, causando a formação de coágulos sanguíneos e danos cerebrais.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Configuração

1. Prepare a cama cirúrgica em uma almofada de aquecimento conectada a uma bomba de calor a 37 ° C por pelo menos 15 minutos antes da cirurgia. Coloque um rolo de pescoço usando o cilindro de uma seringa de 3 ml na cama cirúrgica. Prepare o gás anestésico com isoflurano a 2% em ar medicinal.
2. Prepare pinças autoclavadas, tesouras, porta-microagulhas, hemostático, cotonetes e suturas. Além disso, prepare cola de tecido e pomada para os olhos.
3. Configure o sistema de hipóxia e os controladores de temperatura com uma lâmpada de aquecimento e sonda retal. Prepare o gás hipóxia com isoflurano a 2% em 7,5% de O₂ balanceado por 92,5% de N₂.
4. Uma hora antes da cirurgia, os camundongos são analgizados por injeção subcutânea de um Meloxicam de liberação lenta (4,0 mg / kg).

2. Hipóxia-isquemia cerebral transitória (Figura 1B)

1. Anestesiar camundongos C57BL/6 machos de 10 a 13 semanas pesando 22 a 30 g na câmara de indução anestésica com isoflurano a 3% até que o animal não responda ao aperto do pé e, em seguida, remover os pelos do pescoço direito usando um barbeador eletrônico.
2. Coloque os camundongos no leito cirúrgico conectados com isoflurano a 2% em ar medicinal a uma taxa de fluxo de 2 L / min. Prenda os membros anteriores esticados ao longo do rolo do pescoço nas laterais usando fita médica.
3. Limpe o local da cirurgia para incisão com betadina seguida de álcool e cotonetes.
4. Sob um microscópio de dissecação, faça uma incisão cervical direita de 0,5 cm usando uma pinça reta e uma microtesoura a cerca de 0,2 cm lateral da pele da linha média.
5. Use um par de pinças finamente serrilhadas para separar a fáscia e o tecido para expor a artéria carótida comum direita (RCCA). Separe cuidadosamente o RCCA do nervo vago usando um par de pinças finas e lisas.
6. Dê um nó vivo em duas suturas de seda 5-0 pré-cortadas (soltáveis) no RCCA e, em seguida, costure a pele usando suturas de monofilamento de nylon 4-0 (Figura 1C) .
7. Aplique pomada para os olhos em ambos os olhos para evitar o ressecamento.
8. Transfira rapidamente os camundongos para o sistema de hipóxia e coloque seus narizes e bocas em uma máscara facial com isoflurano a 2% em 7,5% O₂ a uma taxa de fluxo de 0,5-1 L/min por 30 min.
   1. Durante a hipóxia, use controladores de temperatura com aquecimento lamps para controlar a temperatura retal em 37.5 ± 0.5 °C. Monitore a frequência respiratória em 80-120 respirações/min. Manter a temperatura corporal acima de 37 °C durante a hipóxia é importante para criar um infarto cerebral consistente. A frequência respiratória baixa geralmente ocorre após 20 minutos de hipóxia. Remova a máscara facial e permita o suprimento de ar normal se a frequência respiratória cair abaixo de 40. Isso leva de 1 a 2 minutos e não conta para a duração da hipóxia de 30 minutos

Resultados

Figura 1: Procedimento de insulto transitório de hipóxia-isquemia cerebral (tHI) em camundongos adultos. (A) A tríade de Virchow que impulsiona a trombose inclui estase do fluxo sanguíneo, lesão endotelial e hipercoagulabilidade do sangue. (B) Um diagrama esquemático do procedimento de AVC tHI. Dois nós liberáveis foram amarrados na artéria carótida comum direita (CCA) e seguidos pelo fornecimento de...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Camundongos machos adultos	Rio Charles	C57BL/6	10 ~ 13 semanas (22 ~ 30 g)
Sistema Móvel de Anestesia para Animais de Laboratório	VetEquip	901807	Anestesia
Tanque de ar medicinal (comprimido)	Airgas	UN1002	Anestesia
Isoflurano	Piramal Healthcare	NDC 66794-013-25	Anestesia
Sistema de anestesia com animais de laboratório em várias estações	Surgivet	V703501	Sistema de hipóxia
7,5% O2 equilibrado por 92,5% N2 tanque	Airgas	UN1956	Sistema de hipóxia
Controlador de temperatura com lâmpada de aquecimento	Cole Parmer	EW-89000-10	Controladores de temperatura
Sonda retal	Cole Parmer	NCI-00141PG	Controladores de temperatura
Microscópio de dissecação	Olimpo	SZ40	Configuração cirúrgica
Bomba de calor com almofada de aquecimento	Gaymar	TP700	Configuração cirúrgica
Pinça curva fina (serrilhada)	FST	11370-31	Instrumento cirúrgico
Pinça curva fina (lisa)	FST	11373-12	Instrumento cirúrgico
micro tesoura	FST	15000-03	Instrumento cirúrgico
Micro porta-agulhas	FST	12060-01	Instrumento cirúrgico
Hemostáticos de Halsted-Mosquito	FST	13008-12	Instrumento cirúrgico
5-0 sutura de seda	Aparelho de Harvard	624143	Material cirúrgico
4-0 Sutura de monofilamento de nylon	VEJA	766B	Material cirúrgico
Cola de tecido	Laboratórios Abbott	NC9855218	Material cirúrgico
Pomada Puralube Vet	Fisher	NC0138063	Prevenção do ressecamento dos olhos