Fabricação de microesferas de polímero liberador de beta-amilóide para modelagem da doença de Alzheimer

Resumo

Fonte: Almari, B., et al. Fabricação de microesferas de alginato secretoras de β amilóide para uso na modelagem da doença de Alzheimer. J. Vis. Exp. (2019).

Este vídeo demonstra um método para fabricar microesferas de polímero que encapsulam células secretoras de beta-amilóide neurotóxicas. A suspensão célula-polímero é processada por meio de um dispositivo de fabricação de microesferas, com gelificação de polímero obtida por meio de reticulação de cálcio, formando microesferas esféricas ao redor das células. O polímero permite a proliferação celular enquanto permite a liberação controlada e de longo prazo de beta-amilóide, simulando seu acúmulo na doença de Alzheimer.

Protocolo

1. Preparativos

1. Prepare 100 mL de solução estoque de alginato de ~ 4% (p / v).
   1. Pese 4,4 g de sal de alginato de sódio e adicione o pó seco a 100 mL de solução salina tamponada com HEPES (HBS, ácido sulfônico etano etano 20 mM [HEPES] (0,477 g) com 150 mM de NaCl (0,877 g) em água deionizada permitindo a hidratação.
   2. Use um agitador magnético a ~500 rotações por minuto (rpm) e aqueça até 50 °C para permitir a hidratação completa do alginato.
      nota: O alginato pode precisar de uma ou duas horas para ser completamente hidratado. Para poupar tempo, a solução de alginato pode ser preparada um dia an....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
0.22 um filtro PES	Merck, Reino Unido	SLGP033RS
15mm Netwell inserir filtro de malha de 74 um	Constar, eua	#3477
Sal de sódio de ácido algínico de algas marrons	Sigma-Aldrich,uk	A0682
Cloreto de cálcio	Sigma-Aldrich,uk	C1016
CellTiter96 AQual de proliferação celular de uma solução	Promega, EUA	G3580
Encapsulador	Inotech	IE-50	Nº de série 05.002.01-2005
HEPES	Sigma-Aldrich,uk	H4024
Solução salina tamponada com fosfato	Sigma-Aldrich,uk	D1408
Cloreto de sódio	Sigma-Aldrich,uk	433209
Citrato de trispdium di-hidratado	Sigma-Aldrich,uk	W302600-K
Solução de tripsina-EDTA	Sigma-Aldrich,uk	T4049