Todos os procedimentos que envolvem coleta de amostras foram realizados de acordo com as diretrizes do IRB do instituto.
NOTA: O protocolo descreve um procedimento de corte cerebral bihemisférico simétrico para avaliação cerebral post-mortem finalizado para estudos neuropatológicos em humanos. Descrições detalhadas dos aparelhos, instrumentos, materiais e suprimentos necessários para o corte do cérebro humano serão excluídas. Os materiais e suprimentos para dissecções cerebrais são selecionados a critério do investigador único e são baseados em ferramentas de autópsia permitidas ou aprovadas em cada instituição de pesquisa. O conjunto mínimo de ferramentas e materiais necessários para este procedimento é descrito na Tabela de materiais/equipamentos. Procedimentos de corte específicos e precauções para suspeitas de doenças cerebrais transmissíveis, como a DCJ humana, estão fora dos objetivos deste manuscrito e estão disponíveis em outras fontes.
1. Corte de cérebro bi-hemisférico simétrico
Nota: Certifique-se de que o cérebro recebeu a fixação tecidual necessária (usando, por exemplo, formalina a 10% tamponada neutra) por um período de duas a três semanas, dependendo das condições periagonais, metabólicas (ou seja, pH) e de preservação tecidual (ou seja, temperatura). No entanto, para estudos de correlação imagem-patologia, foi sugerido um período de fixação mais longo (>5,4 semanas).
- Coloque o cérebro em uma superfície plana de frente para o investigador, com os pólos frontais direcionados na direção oposta em relação ao investigador.
- Coloque o cérebro para permitir a visualização completa e clara de todos os giros e sulcos corticais de todo o cérebro (Figura 1a).
- Primeiro, procure anomalias meníngeas, assimetrias macroscópicas hemisféricas (possíveis indicadores de fenômenos focais, lobares ou hemisféricos generalizados de atrofia), lesões macroscópicas teciduais (ou seja, tumores ou hérnia), malformações congênitas, anormalidades vasculares e quaisquer outras possíveis anormalidades ou apresentações incomuns da superfície cerebral.
nota: Para obter descrições detalhadas de como avaliar um cérebro humano, consulte os livros didáticos de neuropatologia e manuais de autópsia disponíveis comercialmente.
2. Sequência de protocolo
- Fique de frente para os pólos frontais afastados do investigador, com os aspectos superficiais dos hemisférios (telencéfalo) voltados para o investigador. Tire quantas fotos digitais forem necessárias em cada caso particular para documentar possíveis macroanomalias e levar em conta possíveis considerações clínico-neuroanatômicas e pós-corte. Peça a um assistente de pesquisa que tire fotografias digitais perpendicularmente ao cérebro para capturar toda a superfície cortical (Figura 1a - c).
- Marque os giros corticais pré e pós-centrais com tinta ou agulhas coloridas antes de cortar o cérebro (Figura 1b).
nota: Este procedimento facilita um reconhecimento mais imediato dos córtices primários motores e somatossensoriais após o corte.
- Gire o cérebro em 180 graus, mantendo-o voltado para a mesma direção (ou seja, os pólos frontais voltados para longe do investigador). Inspecione cuidadosamente a base do cérebro. Preste atenção especial às condições dos sistemas cerebrovasculares (ou seja, artérias basilares e vertebrais e o círculo de Willis) e nervos cranianos em seus níveis de saída/entrada do tronco encefálico. Gerencie os bulbos e tratos olfatórios com cuidado especial para evitar a laceração dos tecidos devido à sua extrema fragilidade.
- Tire quantas fotos digitais forem necessárias em cada caso particular para documentar possíveis macroanomalias e levar em conta possíveis considerações clínico-neuroanatômicas e pós-corte. Peça a um assistente de pesquisa que tire fotografias digitais perpendicularmente ao cérebro para capturar a totalidade das superfícies corticais e do tronco cerebral.
- De frente para a base do cérebro e usando um bisturi, corte o tronco encefálico transversalmente ao nível da porção superior da ponte (o mais próximo possível da base do cérebro). Inspecione cuidadosamente o SN (ou seja, quanto à palidez) e outras estruturas vizinhas. Tome nota, possivelmente usando um dispositivo gravador de áudio, de qualquer aparência incomum do cérebro em comparação com um cérebro normal.
- Novamente, gire o cérebro em 180 graus e, usando uma faca afiada, separe os dois hemisférios cortando o corpo caloso centralmente através da fissura longitudinal medial e seguindo uma direção fronto-occipital. Inspecione cada lado de cada hemisfério em busca de possíveis anomalias (por exemplo, aumentos ventriculares, malformações, amolecimento do tecido, tumores, etc.). Veja a Figura 2a.
- Tire quantas fotos digitais forem necessárias em cada caso particular para documentar possíveis macroanomalias e levar em conta possíveis considerações clínico-neuroanatômicas e pós-corte. Peça a um assistente de pesquisa que tire fotografias digitais perpendicularmente ao cérebro para capturar toda a superfície cortical. Observe qualquer característica cerebral incomum em comparação com um cérebro normal.
- Coloque os dois hemisférios planos, deitados em seus aspectos mediais, com os lobos frontais voltados para longe do investigador, conforme mostrado na Figura 2b. Coloque-os de forma que seus centros se toquem (também em caso de assimetria hemisférica acentuada).
- Usando uma faca afiada, corte manualmente os dois hemisférios cerebrais, começando nos pólos frontais e movendo-se em direção aos pólos occipitais por todo o comprimento dos hemisférios. Obtenha duas séries de blocos de tecido cerebral de 1 cm de espessura (cerca de 18 placas para cada hemisfério).
- Coloque as placas cerebrais em uma sequência anatomicamente organizada (direção fronto-occipital) em uma superfície plana separada. Use uma superfície branca com uma régua impressa para melhor contraste ao fotografar. Exiba as duas séries de placas cerebrais de forma anatomicamente simétrica (direção fronto-occipital), garantindo que suas superfícies coronais sejam visíveis para inspeção ocular direta e fotografia digital (Figura 3a). Use superfícies de corte com grades milimétricas impressas em ambos os lados para localizar estruturas cerebrais, tamanhos e possíveis anormalidades de maneira mais precisa.
- Tire quantas fotos digitais forem necessárias em cada caso particular para documentar possíveis macroanomalias e levar em conta possíveis considerações clínico-neuroanatômicas e pós-corte. Peça a um assistente de pesquisa que tire fotografias digitais perpendicularmente ao cérebro para capturar toda a superfície cortical. Faça anotações (possivelmente usando um dispositivo gravador de áudio) de qualquer aspecto incomum do cérebro em comparação com um cérebro normal.
- Usando um bisturi afiado, disseque manualmente blocos retangulares menores de tecido cerebral para cada região cerebral estabelecida. Siga o esquema de coleta da região cerebral proposto descrito na Tabela 1.
- Coloque cada bloco de tecido em histocassetes rotulados separadamente.
nota: Cada bloco de tecido cerebral precisa ser cortado para ajustar, tanto quanto possível, o volume máximo padrão do histocassete (30 x 20 x 4 mm3).
- Rotule os histocassetes usando um código de desidentificação para cada caso e usando identificadores neuroanatômicos específicos (não use letras ou números aleatórios para cérebros diferentes; em vez disso, sempre use os mesmos nomes anatômicos regionais ou números correspondentes, conforme mostrado na Tabela 1). Crie códigos de desidentificação, por exemplo, gerando números aleatórios ou semi-aleatórios para cada caso (ou seja, BRC 130, onde 5B permanece para Cérebro, R permanece para Recurso, C permanece para Centro e 130 é uma adesão progressiva ou AD160001, onde AD significa "estudo da doença de Alzheimer", 16 é o ano em que a autópsia foi realizada (2016), e 0001 um número de espécime de acesso progressivo).
nota: Esta etapa é muito útil para futuros pesquisadores. Mantenha uma legenda e especifique o hemisfério (L = hemisfério esquerdo, R = hemisfério direito). Use duas cores diferentes de histocassetes, estabelecendo uma cor específica para cada hemisfério.
- Tire quantas fotos digitais forem necessárias em cada caso particular para documentar possíveis macroanomalias e levar em conta possíveis considerações clínico-neuroanatômicas e pós-corte. Peça a um assistente de pesquisa que tire fotografias digitais perpendicularmente ao cérebro para capturar toda a superfície cortical. Tome nota de qualquer característica incomum do cérebro em comparação com um cérebro normal.
- Tire fotos digitais (quantas forem necessárias ou desejadas) de todo o cérebro cortado e dos histocassetes associados.
Tabela 1. Esquema de corte bi-hemisférico. Esta tabela mostra a área anatômica única a ser dissecada nos hemisférios esquerdo e direito de cada cérebro. O corte simétrico bi-hemisférico pode ser feito em cérebros frescos e fixos.
| Região neuroanatômica | etiqueta | Esquerda Fixa | Direito Fixo | Deixado congelado | Congelado à direita |
| Bulbo olfativo | Ob | | | | |
| Córtex frontal polar | Pfc | | | | |
| Giro frontal médio | Mfg | | | | |
| Giro orbito-frontal | OFG | | | | |
| Córtex parietal lóbulo inferior | PCLI | | | | |
| Córtex temporal superior | Stc | | | | |
| Córtex temporal médio | Mcc | | | | |
| Córtex cingulado anterior | Acc | | | | |
| Córtex cingulado posterior | Pcc | | | | |
| Giro pré-central (Coloque um alfinete antes de cortar) | PrCRG | | | | |
| Giro pós-central (Coloque um alfinete antes de cortar) | PoCRG | | | | |
| Giro occipital (incluindo as áreas 17 e 18 de Broadmann) | Oc | | | | |
| amígdala | Amy | | | | |
| Gânglios da base ao nível da comissura anterior com o núcleo basal de Meynert | AMIGO | | | | |
| Thallamus e subthallamus | ASSIM-SEGUNDO | | | | |
| Corpos mamilares e hipotálamo | SENHORA + HIPO | | | | |
| Núcleos de forbrana basal | Bf | | | | |
| Hipocampo anterior | ah | | | | |
| Hipocampo posterior (no nível lateral do corpo geniculado), incluindo córtex entorrinal e córtex temporal inferior | PH+CE+ITC | | | | |
| Córtex cerebelar e núcleo dentado | CRBDe | | | | |
| Mesencéfalo (incluindo Substantia nigra) | MESSN | | | | |
| Ponte incluindo Locus coeruleus (LC) | Pons | | | | |
| Medula oblonga Medula incluindo DMV | MObi | | | | |
| Medula spinalis | MSpi | | | | |
| Parte superior da medula espinhal | Sc | | | | |
| Dura Madre | decímetro | | | | |
