Induzindo perda auditiva em camundongos por meio da exposição prolongada a sons de alto volume

Resumo

Fonte: Lee, D. et. al., Condições experimentais modificadas para perda auditiva induzida por ruído em camundongos e avaliação da função auditiva e danos às células ciliadas externas. J. Vis. Exp. (2023)

Este vídeo demonstra o procedimento de perda auditiva induzida por ruído em camundongos. O som de alto volume danifica as células ciliadas do ouvido interno e interrompe as vias auditivas, resultando em deficiência auditiva.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Indução de perda auditiva induzida por ruído (PAIR) em camundongos

1. Prepare a gaiola para os camundongos experimentais
   1. Para isso, use uma gaiola de ratoeira com dimensões de 14 cm × 17 cm × 24 cm. Corte quatro pedaços de papelão ondulado em tamanhos apropriados, fazendo com que caibam na gaiola (13 cm × 23 cm e 13 cm × 16 cm).
   2. Para evitar que os ratos cortem os pés pela grade de malha, coloque duas das peças na parte inferior e na parte de trás, respectivamente. Coloque as outras duas peças perpendicularmente entrelaçadas uma com a outra, para dividir o espaço dentro da gaiola em quartos.
2. Realize este estudo em uma caixa à prova de som. Coloque um alto-falante 8.5 cm na frente da gaiola e coloque o alto-falante e a gaiola em uma caixa à prova de som.
3. Abra o software aplicativo CLIO.
4. Mova o cursor para o ícone do alto-falante e clique em TwoSin. Insira e altere o valor de Freq 1 a 1000 Hz e Freq 2 a 6000 Hz e clique em OK para iniciar a reprodução do som.
5. Na guia Leq, altere decibel Volt (dBV) para decibéis Nível de pressão sonora (dBSPL). Depois de definir a hora na interface do software, clique no botão triângulo verde para reproduzir o som.
6. Coloque um microfone na frente do alto-falante a uma distância de 8.5 cm para calibrar o nível de ruído (Figura 1). Ajuste o nível de ruído para 125 dB SPL-A e monitore continuamente por pelo menos 3 min para garantir que o nível de ruído seja suficientemente estável. Use um gerador, um analisador e um amplificador para criar e controlar o ruído. (Figura 2)
   NOTA: Execute esta etapa em uma caixa à prova de som para evitar danos à audição do operador.
7. Coloque quatro camundongos C57BL/6J machos na gaiola (um para cada quarto) para exposição ao ruído. Atribua aleatoriamente os mouses em cada quarto durante a exposição ao ruído. Coloque um microfone na parte superior da gaiola para monitorar o nível de ruído durante a exposição ao ruído (Figura 3).
   NOTA: Faça esta etapa em uma caixa à prova de som para evitar danos à audição do operador.
8. Exponha os mouses ao ruído nas frequências de 1 kHz e 6 kHz continuamente por 6 h por dia, durante 5 dias consecutivos.

Resultados

Figura 1: Cálculo de tensão a partir da calibração. Para cada frequência específica, o valor da tensão selecionada (eixo horizontal) será inserido na curva de calibração para obter o nível sonoro...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
1/4" CCP Free-field Standard Microphone Set	GRAS	428158	Para exposição
Rat trap cage			14 cm x 17 cm x 24cm
Amplificador de som, MT-1000	unika		For noise exposure
Gerador de som/analisador/diversos, FW-02	CLIO	620300719	Para exposição
Câmara à prova de som	IEA Electro-Acoustic Technology		Para exposição ao ruído e ABR
Speaker	IEA Electro-Acoustic Tecnologia		Para exposição ao ruído

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