Medindo a resposta auditiva do tronco encefálico em camundongos

Resumo

Fonte: Lee, D., et. al. Condições experimentais modificadas para perda auditiva induzida por ruído em camundongos e avaliação da função auditiva e danos às células ciliadas externas. J. Vis. Exp. (2023)

Este vídeo demonstra a medição da resposta auditiva do tronco encefálico (ABR) em um camundongo. Os eletrodos são colocados na cabeça, atrás da orelha e perto da cauda de um camundongo anestesiado. Estímulos acústicos em várias intensidades são entregues e os sinais elétricos gerados são registrados como formas de onda.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Avaliação do limiar auditivo do limiar auditivo do tronco encefálico (PEATE)

1. Use um sistema comercial de teste ABR projetado especificamente para pequenos animais.
2. Injete intraperitonealmente uma mistura de tiletamina e zolazepam (40 mg / kg) e xilazina (9,3 mg / kg) nos camundongos para anestesia geral.
   NOTA: A avaliação do ABR leva ~2 h. Certifique-se de fornecer suporte térmico por meio de uma almofada de aquecimento e aplique pomada para os olhos para evitar o ressecamento enquanto o mouse estiver sob anestesia.
3. Meça o ABR no camundongo sob anestesia geral. Coloque eletrodos de agulha subdérmica (12 mm) no vértice, atrás do pavilhão auricular da orelha esquerda e nas costas perto da cauda para medir o limiar auditivo.
4. Apresente estímulos acústicos usando um alto-falante colocado a 1 cm da orelha esquerda do animal.
5. Use um osciloscópio para controlar os estímulos acústicos. Escolha Onda senoidal para os estímulos e 10 k para a escala da janela. Gire o botão Frequência para obter a frequência desejada dos estímulos acústicos.
6. Ajuste a intensidade do estímulo girando o botão amplitude ou AMLP no gerador de funções. Obtenha a intensidade de estímulo desejada girando o botão AMLP para uma tensão adequada, calculada a partir da calibração.
7. Colete as medições do ABR sob uma série de intensidades de estímulo, de 10 dB de nível de pressão sonora ou SPL a 100 dB SPL, com um tamanho de passo de 10 dB.
   NOTA: Meça o limiar auditivo em uma caixa à prova de som. O nível mínimo de intensidade do estímulo que poderia dar origem a uma Onda V discernível no sinal coletado foi assumido como sendo o limiar ABR (Figura 1). Avaliação pós-PEATE, monitorar o animal até que ele se recupere da anestesia (~1 h).

Resultados

Figura 1: Medida da audição do PEATE. Resultados representativos do PEATE em 12 kHz, coletados no 13º dia (1 semana após a exposição ao ruído). A Onda V em cada intensidade é rotulada se discernível.

Materiais