Indução de Pressão Intraocular Elevada em Modelo de Rato

Resumo

Fonte: Lani-Louzada, R., et al., Cauterização de círculo completo do plexo vascular límbico para glaucoma induzido cirurgicamente em roedores. J. Vis. Exp. (2022)

Este vídeo demonstra a indução e monitoramento da pressão intraocular (PIO) elevada em um modelo de rato. O processo envolve a cauterização dos vasos sanguíneos límbicos, resultando em oclusão do vaso e PIO elevada. O rato é então autorizado a se recuperar e a PIO é monitorada regularmente nos olhos experimental e de controle para comparação.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

No presente trabalho, foram utilizados ratos Lister Hooded de ambos os sexos, com idade entre 2 e 3 meses e pesando 180-320 g. No entanto, o procedimento pode ser adaptado em diferentes linhagens de ratos de várias faixas etárias.

Cirurgia de hipertensão ocular e acompanhamento clínico

1. Animais domésticos em ambiente de temperatura controlada e ciclo claro/escuro de 12 h (6h: luz acesa/ 18h: luz apagada) com ração peletizada irradiada com radiação gama padrão (Nuvilab® CR-1, Quimtia S/A, Brasil) e água (filtro triplo, com carvão ativado não tóxico) disponíveis libitum.
2. Prepare uma mistura de coquetel anestésico composta por três partes de cloridrato de cetamina a 10% e uma parte de cloridrato de xilazina a 2% (diluente: água estéril).
3. Conter suavemente o animal segurando a pele dorsal e induzir a anestesia por administração intraperitoneal de 1 μL/g de peso corporal da mistura (cetamina: 75 mg/kg; xilazina: 5 mg/kg). Verifique a anestesia adequada após aproximadamente 5 minutos, realizando uma resposta de beliscamento do dedo do pé.
4. Anestesiar topicamente ambas as superfícies oculares instilando cloridrato de proximetacaína colírio a 0,5%. Aguarde 30-60 s e remova a solução restante da face anterior do globo, tocando suavemente a conjuntiva bulbar nasal ou lateral com um pequeno cotonete estéril.
5. Meça a PIO basal dos olhos de controle experimental e contralateral, colocando o animal em decúbito ventral na bancada, de modo que a superfície da córnea seja facilmente acessível à ponta do tonômetro.
6. Use o tonômetro portátil de aplanação ou de rebote (Figura 1A). Posicione a ponta do tonômetro de forma que toque levemente a zona central da córnea perpendicularmente. Adquira e calcule a média de 3 a 5 médias confiáveis geradas por máquina. Cada média é calculada automaticamente pelo dispositivo após seis medições individuais bem-sucedidas.
   1. Carregue o tonômetro de rebote com uma sonda e pressione o botão de medição uma vez para ligá-lo, enquanto coloca a ponta do dispositivo para cima para evitar que a sonda caia. Após ligá-lo, o display mostrará 00 indicando que o equipamento está pronto para medir.
   2. Posicione o dispositivo com a ponta da sonda a 1-4 mm da córnea e adquira as medições pressionando rápida e cuidadosamente o botão de medição, sem mover o equipamento. Cada medida bem-sucedida é identificada por um bipe curto e, após seis vezes, a média é exibida na tela do dispositivo.
      NOTA: Apesar de uma longa experiência com tonômetro de aplanação, para otimizar todo o procedimento, os autores recomendam o uso de um tonômetro de rebote, que facilita a aquisição de uma medida confiável da PIO.
7. Coloque o animal em uma posição de decúbito lateral leve sob um microscópio estéreo e planeje cuidadosamente a cirurgia inspecionando o olho experimental com ampliação de 40x. Não se esqueça de manter o olho de controle contralateral lubrificado durante o procedimento, instilando uma gota de carmelose sódica ou hialuronato de sódio.
8. Com a ajuda de uma pinça curva, empurre suavemente o globo ocular experimental para a frente de modo a expor a vasculatura que circunda 360° do limbo. Com a outra mão, cauterize suavemente os vasos ao redor da córnea com um cautério oftálmico de baixa temperatura (1.300 ° F; Bovie Medical, EUA) (Figura 1B-E).
   NOTA: A referida cauterização tem uma ponta redonda que deve tocar longitudinalmente a vasculatura límbica.
9. Tenha cuidado para não cauterizar a periferia da córnea, pois isso pode resultar em opacificação da córnea pós-operatória, o que impede a avaliação in vivo da função retiniana.
10. Observe o surgimento de pequenas marcas circulares de cauterização no limbo escleral, a obliteração da vasculatura límbica e a dilatação da pupila no olho operado, que são sinais de um procedimento cirúrgico bem-sucedido.
    NOTA: Como a vasculatura límbica de ratos e camundongos é anatomicamente semelhante e a cauterização usada tem uma ponta pequena e suave, este protocolo também pode funcionar para o olho do camundongo sem qualquer adaptação.
11. Após a cirurgia, verifique a PIO pós-operatória imediata em ambos os olhos, conforme descrito na etapa 1.5.
12. Aplique uma gota de acetato de prednisolona oftálmica (1,2 mg/mL) e mantenha-a em contato com a superfície anterior do olho experimental por cerca de 40 s, depois substitua-a por uma pomada oftálmica de antibióticos (cloridrato de oxitetraciclina 30 mg/g mais polimixina B 10.000 U/g; ou ciprofloxacina 3,5 mg/g). Realize injeção intramuscular de cloridrato de tramadol (dose única; 2 mg / kg) para evitar dor após o procedimento.

Resultados

Figura 1: Cauterização térmica do plexo vascular límbico e consequências para a função retiniana in vivo. (A) Métodos alternativos para medir a PIO em ratos: tonometria de rebote (superior) e tonometria de aplanação (inferior). (B-E) Procedimento cirúrgico; ponta de seta: plexo vascular límbico; seta: pinça curva usada para expo...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Cautery Low Temp Fine Tip 10/bx	Bovie Medical Corporation	AA00	Cautério oftálmico de baixa temperatura
Cetamin Syntec do Brasil Ltda
	000200-3-000003	Cloridrato de cetamina 10%
Ecofilm	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0298.0487	Carmelose sódica 0.5%
Hyabak	União Química Farmacêutica Nacional S/A	MS-8042140002	Hialuronato de sódio 0.15%
Icare Tonolab	Icare Finland Oy	TV02 (número do modelo)	Tonômetro
Maxiflox	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0298.0489	Ciprofloxacina 3.5 mg/g
Ster MD	União Química Farmacêutica Nacional S/A	MS-1.0497.1287	Acetato de prednisolona 0.12%
Terolac	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0497.1286	Cetorolaco trometamol 0,5%
Terramicina	Laboratórios Pfizer Ltda	MS-1.0216.0024	Cloridrato de oxitetraciclina 30 mg/g + polimixina B 10.000 U/g
Tono-Pen XL	Reichert Technologies	230635	Tonômetro
	Carl Zeiss-Stereo		microscópio para cirurgia e dissecção de retina

portátil de reboteportátil de aplanação digital