Realizando a axotomia de esmagamento no nervo facial em um modelo de camundongo

Resumo

Fonte: Olmstead, D. N., et al., Axotomia do nervo facial em camundongos: um modelo para estudar a resposta do motoneurônio à lesão. J. Vis. Exp. (2015).

Este vídeo demonstra o procedimento de esmagamento do nervo facial em um camundongo, onde a dissecção contundente através de pontos de referência importantes expõe o tronco do nervo facial no forame estilomastóideo. As pinças são então usadas para comprimir o tronco nervoso, induzindo danos axonais e interrompendo a transmissão do sinal neuronal.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Abordagem cirúrgica

1. Alinhe e focalize o estereoscópio com o campo cirúrgico. Ajuste o cone do nariz e prenda-o com fita adesiva para que fique posicionado ao longo da borda do campo visual.
2. Com o mouse deitado do lado esquerdo, prenda a borda da orelha direita no cone do nariz, expondo a área atrás da orelha onde a incisão será feita. Certifique-se de que a veia auricular posterior se desloque horizontalmente pela orelha. Observe que o posicionamento correto do animal e a fita adesiva da orelha são cruciais para encontrar rapidamente o nervo facial.
3. Molhe o pelo na orelha e atrás dela com etanol 70% e raspe o local da cirurgia com lâmina de barbear ou bisturi. Molhar previamente o pelo facilita o barbear neste local anatômico.
4. Limpe a pele com uma solução de iodo, como o esfoliante cirúrgico Betadine (iodopovidona a 7,5%), seguido de etanol a 70%. Repita esta limpeza mais duas vezes para desinfetar completamente a área.
5. Para determinar onde fazer a incisão, trace a veia auricular posterior da orelha caudalmente até a área posterior à protuberância da orelha. Usando uma tesoura de mola, faça uma incisão de 4 mm 2 a 3 mm posterior à protuberância.
6. Dissecar através da gordura subcutânea e da fáscia usando dissecção romba. Evite cortar direto com a tesoura, pois os vasos sanguíneos ou o tecido muscular podem ser facilmente danificados.
7. Se ocorrer sangramento, aplique pressão no local da cirurgia com um cotonete estéril por pelo menos 30 segundos. Se ocorrer perda significativa de líquidos, injete no camundongo por via intraperitoneal até 0,5 ml de solução salina estéril a 0,9% usando uma agulha de 25 ou 27 G.
8. Use vários pontos de referência importantes, o nervo acessório espinhal, o canal auditivo e o músculo digástrico anterior (descritos abaixo), para localizar o nervo facial. Disseque ao redor desses pontos de referência até que os ramos do nervo facial sejam visualizados. O nervo aparecerá como uma estrutura branca sólida significativa quando for revelado, e uma camada de fáscia o adere às estruturas subjacentes.
   1. Encontre o nervo acessório espinhal, que viaja da porção caudal do crânio para inervar o músculo trapézio, uma vez que a gordura subcutânea e a fáscia tenham sido dissecadas. O nervo facial é profundo ao nervo acessório espinhal.
   2. Encontre o canal auditivo cartilaginoso que parece branco perolado e pode ser visto rostral ao nervo facial.
   3. Encontre o ventre muscular do músculo digástrico anterior que fica no topo e caudal ao nervo facial.
9. Quando os principais ramos do nervo facial forem visualizados, trace-os dorsalmente para encontrar sua origem no forame estilomastóideo. Usando a pinça Dumont de ponta fina # 5/45 para manter o local da cirurgia aberto, avance as pontas da tesoura de mola seguindo o caminho do nervo e, em seguida, mova a pinça dorsalmente para manter a área recém-avançada aberta.
10. Visualize o tronco do nervo facial com os ramos zigomático, bucal e marginal mandibular neste ponto.
    NOTA: O ramo temporal será encontrado mais próximo do forame. O nervo mandibular marginal se ramifica em suas partes superior e inferior mais próximas da mandíbula, portanto, esses ramos nervosos não serão visíveis neste nível.
    1. Se estiver realizando uma lesão por esmagamento, use a pinça Dumont # 5/45 para comprimir o nervo por 30 segundos usando pressão constante para cortar todos os axônios e, em seguida, repita esse esmagamento em um segundo ângulo perpendicular ao primeiro local de esmagamento. Evite aplicar quantidades variáveis de pressão durante o esmagamento de 30 segundos, caso contrário, a lesão será inconsistente entre os animais.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Stereo Microscope	Leica	M60
Fita adesiva	Fisher Scientific	15-952
Vannas-Tübingen Spring Scissors - Straight/Sharp/8.5cm/5mm cutting edge	Fine Science Tools	15003-08	Esterilizar antes de usar
Dumont #5/45 Forceps - Standard dicas / angular 45 ° / Dumoxel / 11cm	11251-35	Esterilizar antes de usar
0.9% Injeção de cloreto de sódio, USP	Hospira	0409-4888-10
Betadine, 16 oz, com dispensador<	19-027132
70% Ethanol
Glass Bead Sterilizer

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