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Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.
1. Colocação de clipes de aneurisma
- Coloque um clipe de aneurisma de rato 30 G em cada artéria uterina. Garanta a cessação do fluxo sanguíneo, incluindo pulsos proximais e distais, e o escurecimento dos vasos uterinos, incluindo placentas individuais. Cubra os chifres expostos e todo o campo cirúrgico com gaze e irrigue com solução salina estéril. Irrigue o campo aproximadamente a cada 10 minutos para mantê-lo úmido.
- Após 60 min, retire a gaze e irrigue o campo. Certifique-se de que os cornos e vasos uterinos estejam adequadamente umedecidos para uma remoção bem-sucedida do clipe. Remova cuidadosamente cada clipe de aneurisma usando uma pinça. Tome cuidado para não causar trauma ao vaso e mantenha a integridade do tecido durante a remoção.
- Irrigue bem os cornos uterinos e o campo, tomando cuidado para remover quaisquer fios de gaze perdidos dos sacos amnióticos.
2. Injeção de lipopolissacarídeo em sacos amnióticos
- }Na base de cada saco amniótico individual, logo anterior à placa placentária, injete 100 μl de lipopolissacarídeo (LPS) (4 μg/saco) com corante azul de Evan diluído no líquido amniótico. Use uma pinça romba para estabilizar e girar cada saco amniótico em uma posição ideal para injeção. O corante azul diluído de Evan é um agente de contraste que é útil para confirmar a colocação e injeção adequadas da seringa.
NOTA: Use apenas uma seringa de insulina ultrafina de 0,3 ml com uma agulha de 8 mm 31 G anexada para as injeções intra-amnióticas. O uso de agulhas de calibre maior resultará em perda crônica de líquido amniótico, morte fetal e reabsorção da gravidez. Pequenas quantidades de vazamento de líquido amniótico após a remoção da seringa podem ser atenuadas por pressão direta no saco amniótico. Alguns fetos de ratos podem tolerar um grau de oligoidrâmnio. No entanto, a perda aguda de líquido amniótico de uma punção com agulhas de calibre grande ou punção acidental resultando em vazamento crônico de fluido resulta em perda fetal e, em casos graves, perda de gestações vizinhas. - Irrigue os cornos uterinos 3x com solução salina estéril.
3. Fechando a laparotomia
- Usando uma pinça, retorne cuidadosamente os cornos uterinos à cavidade peritoneal. Garantindo um espaço adequado entre os sacos amnióticos e a incisão da linha média, aproxime novamente as bordas da camada musculofascial usando uma sutura de seda 3-0. Esteja ciente da colocação dos sacos amnióticos ao fechar a incisão muscular. Tenha cuidado para não suturar dentro ou através de um saco.
- Aproxime novamente a camada de pele, usando uma sutura de seda 3-0, fechando a camada de pele.
NOTA: A laparotomia deve ser fechada em duas camadas de suturas contínuas para permitir a expansão da pele e muscular com o aumento da gestação. As suturas contínuas permitem uma distribuição uniforme da tensão da ferida. Suturas interrompidas são menos desejadas, pois vários nós são irritantes e podem ser facilmente mastigados pelo rato ao se recuperar da anestesia. Grampos cirúrgicos não são desejados. As caudas dos nós cirúrgicos devem ser cortadas muito curtas (<3 mm). - Injete 1 ml de bupivacaína a 0,125% por via subcutânea ao redor das bordas da ferida usando uma agulha 26 G. Administre uma dose de 0,1 mg / kg de buprenorfina por via subcutânea na nuca.
- Desligue o isoflurano e seque o rato com uma toalha conforme necessário. Coloque o rato em uma gaiola doméstica limpa e monitore sua recuperação da anestesia. Certifique-se de que o rato não fique hipotérmico.