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Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.
1. Preparação de Instrumentos Cirúrgicos e Não Cirúrgicos
- Esterilize os instrumentos cirúrgicos e não cirúrgicos em autoclave.
- Limpe a mesa cirúrgica com etanol a 70% e aqueça uma almofada de aquecimento a 37 °C.
- Coloque a almofada de aquecimento na mesa cirúrgica e cubra-a com campos cirúrgicos estéreis.
NOTA: Em todos os procedimentos de sobrevivência, a técnica "No Touch" é usada aqui para manter a esterilidade.
2. Preparação de animais e realização da laminectomia espinhal T9-T10
- Adquira camundongos machos adultos (Balb/c) de 10 semanas de idade. Induza a anestesia em cada animal usando um inalador, começando com isoflurano a 5% e depois diminuindo para 2-3% para manter a sedação pelo restante dos procedimentos.
- Confirme a anestesia completa não obtendo resposta a uma estimulação de nocicepção induzida por pinça de cauda/pata.
- Raspe o cabelo sobre o dorso (da cabeça à cauda) com um aparador elétrico e, em seguida, aplique o creme depilatório (3 min) para remover os pelos restantes. Por fim, lave o dorso com água corrente/esfoliante úmido e devolva os animais às gaiolas.
NOTA: Isso é necessário para evitar irritação adicional na pele e contaminação química no momento da lesão da pele - No dia seguinte, aplique pomada oftálmica nas córneas para proteger os olhos do ressecamento durante o procedimento cirúrgico. Em seguida, esfregue a pele com 3 preparações alternativas de betadine e etanol 70%.
- Com um bisturi, faça uma incisão na pele (~ 1,0-1,5 cm) ao longo da linha média nas costas ao nível das vértebras T8-T12.
NOTA: O nível das vértebras é identificado pela contagem regressiva da vértebra de T13 usando a localização das costelas flutuantes que correspondem à vértebra T13. - Limpe o tecido adiposo subcutâneo para acessar os músculos paraespinhais e, em seguida, disseque-os lentamente para expor os processos espinhosos e as lâminas em ambos os lados.
NOTA: Faça este procedimento com muito cuidado para evitar sangramento excessivo ou qualquer lesão na medula espinhal neste momento. - Realize uma laminectomia para expor a medula espinhal (vértebras T9-T10) descascando suavemente a lâmina espinhal usando uma pinça de microdissecação.
NOTA: Realize a laminectomia de forma que um excesso da medula espinhal fique exposto para facilitar a criação da lesão. No grupo controle, apenas a laminectomia é realizada.
3. Realizando a lesão medular completa (LME) T9-T10
- Usando uma pinça, prenda a coluna vertebral em T8 e levante para exagerar a curvatura da coluna vertebral.
- Usando uma tesoura fina, corte a medula espinhal entre as vértebras T9 e T10 até o assoalho do canal vertebral para garantir a transecção completa.
- Depois de observar a transecção completa sob um microscópio cirúrgico, aplique um pedaço de gordura subcutânea sobre o local da laminectomia para fornecer proteção adicional à medula espinhal antes do fechamento do local da cirurgia.
- Finalmente, feche a ferida e suture os músculos paravertebrais e a fáscia superficial usando suturas contínuas e, em seguida, feche a pele usando clipes de sutura.
- Pós-LM, observar a evacuação no dia seguinte; no entanto, gerencie a bexiga urinária por meio da evacuação manual da bexiga.
NOTA: A Escala de Rato Basso (BMS) pode ser usada para monitorar o progresso da recuperação funcional dos membros posteriores pós-LME no dia 2 e depois semanalmente.