Artigo de método

Um método de limpeza de tecido hidrofóbico para uma amostra de tecido cerebral de rato

28 de abril de 2025

Neste artigo

Resumo

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Fonte: Kirchner, K.N., et al., Um método hidrofóbico de limpeza de tecido para tecido cerebral de rato. J. Vis. Exp. (2020).

Este vídeo demonstra o método de limpeza de tecido hidrofóbico de uma amostra de tecido cerebral de rato. A amostra é desidratada sequencialmente em metanol, tratada com uma mistura de diclorometano e metanol para dissolver lipídios e pigmentos e transferida para éter dibenzílico para limpeza completa do tecido, permitindo imagens detalhadas sem seccionamento fino.

Protocolo

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Todos os procedimentos envolvendo amostras de animais foram revisados e aprovados pelo comitê de revisão ética animal apropriado.

1. Limpeza de tecidos

  1. Incube a amostra em uma solução aquosa deionizada a 20% de metanol / 80% por 1 h em temperatura ambiente (RT).
  2. Incubar a amostra em uma solução aquosa deionizada a 40% de metanol / 60% por 1 h em RT.
  3. Incubar a amostra em uma solução aquosa deionizada a 60% de metanol / 40% por 1 h em RT.
  4. Incubar a amostra em uma solução aquosa deionizada a 80% de metanol / 20% por 1 h em RT.
  5. Incubar a amostra em metanol a 100% por 1 h em RT.
  6. Incubar em metanol fresco a 100% durante a noite em RT.
  7. Incubar em diclorometano (DCM) a 66% / metanol a 33% por 3 h, com agitação, em RT.
  8. Incubar em éter dibenzílico (DBE) sem agitação. Deixe a amostra em DBE até ficar clara e armazene em DBE até a geração de imagens.

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Materiais

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Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
DBESigma-Aldrich108014-1KG
DCMSigma-Aldrich270997-100mL
MethanolSigma-Aldrich34860-1l-R

Reimpressões e permissões

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Etiquetas

Desidrata o com MetanolMistura de Diclorometano e MetanolClareamento com Dibenzil terAumento da Transpar ncia TecidualRedu o do Espalhamento de LuzImagem de Neur nios FluorescentesIncuba o Sequencial em SolventesTratamento com Solventes Hidrof bicos

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