Um método de limpeza de tecido hidrofóbico para uma amostra de tecido cerebral de rato

Resumo

Fonte: Kirchner, K.N., et al., Um método hidrofóbico de limpeza de tecido para tecido cerebral de rato. J. Vis. Exp. (2020).

Este vídeo demonstra o método de limpeza de tecido hidrofóbico de uma amostra de tecido cerebral de rato. A amostra é desidratada sequencialmente em metanol, tratada com uma mistura de diclorometano e metanol para dissolver lipídios e pigmentos e transferida para éter dibenzílico para limpeza completa do tecido, permitindo imagens detalhadas sem seccionamento fino.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo amostras de animais foram revisados e aprovados pelo comitê de revisão ética animal apropriado.

1. Limpeza de tecidos

1. Incube a amostra em uma solução aquosa deionizada a 20% de metanol / 80% por 1 h em temperatura ambiente (RT).
2. Incubar a amostra em uma solução aquosa deionizada a 40% de metanol / 60% por 1 h em RT.
3. Incubar a amostra em uma solução aquosa deionizada a 60% de metanol / 40% por 1 h em RT.
4. Incubar a amostra em uma solução aquosa deionizada a 80% de metanol / 20% por 1 h em RT.
5. Incubar a amostra em metanol a 100% por 1 h em RT.
6. Incubar em metanol fresco a 100% durante a noite em RT.
7. Incubar em diclorometano (DCM) a 66% / metanol a 33% por 3 h, com agitação, em RT.
8. Incubar em éter dibenzílico (DBE) sem agitação. Deixe a amostra em DBE até ficar clara e armazene em DBE até a geração de imagens.

Materiais

< classe de figura='tabela' estilo='largura::601pt;'>

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
DBE	Sigma-Aldrich	108014-1KG
DCM	Sigma-Aldrich	270997-100mL
Methanol	Sigma-Aldrich	34860-1l-R