Analisando estruturas amilóides em uma seção de tecido usando microscopia de imagem de fluorescência

Abstract

Fonte: Nyström, S., et al., Imagem de tecidos amilóides corados com oligotiofenos conjugados luminescentes por microscopia confocal hiperespectral e imagem de tempo de vida de fluorescência. J. Vis. Exp. (2017).

Este vídeo demonstra a análise de estruturas amilóides com microscopia de imagem de fluorescência ou FLIM, usando corante hFTAA para revelar núcleos compactos como azul/verde e periferias instáveis como vermelho/amarelo em imagens codificadas por cores, refletindo a organização amilóide.

Protocol

1. Preparação de amostras de tecido

NOTA: Muitos tipos de tecido podem ser fotografados usando ácido heptâmero-formil tiofeno acético (hFTAA) como marcador amilóide. hFTAA é sensível à conformação agregada. A coloração deve, portanto, ser realizada preferencialmente em agregados ininterruptos sem exposição de epítopos. A qualidade espectral ideal é alcançada se a fixação do tecido for mantida no mínimo. Portanto, o material fresco congelado, suavemente fixado em etanol no momento da coloração, é prefe....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
hFTAA/Amytracker545	Ebba Biotech
Dako Meio de montagem fluorescene	Agilent technologies	GM304
LeicaDM6000	Leica
Lumen 200	Prior
Spectraview system	ASI spectral imaging
Spectraview software	ASI spectral imaging
LSM780	Zeiss
Zen 2010b v6.0 software	Zeiss
FLIM system	Becker & Hickl
Ar/ML 458/488/514	Zeiss
Tunable Laser In Tune	Zeiss