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p style='line-height:1.38000000000000001;margin-bottom:0pt;margin-top:0pt;text-align:justify;' dir='ltr'>
Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE. - Diffusion magnetic resonance imaging (MRI)
NOTA:<span style='font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;text-decoration:none;vertical-align:baseline;white-space:pre-wrap;'> A imagem ponderada por difusão é realizada antes e 1 dia após a indução do trauma.
- < span style = 'família de fontes: Arial, sem serifa; tamanho da fonte: 12pt; estilo da fonte: normal; variante da fonte: normal; peso da fonte: 400; decoração de texto: nenhum; alinhamento vertical: linha de base; espaço em branco: pré-envoltório;'>anestesiar o rato em uma pequena câmara de indução preenchida com uma mistura de isoflurano (5%) e O2. Quando o rato não responde a uma pinça de pata ou cauda, reduza a anestesia para 2% com uma taxa de fluxo de 500 mL / min. Transfira o animal para a cama do scanner na posição de cabeça para baixo.
- Posicione o rato no suporte da cabeça com a barra de dentes e o cone do nariz, administrando a anestesia, e deslize a cabeça para frente até que o centro do cérebro esteja no nível do centro da bobina de ressonância magnética de volume em quadratura. Aplique pomada lubrificante nos olhos em pequenas quantidades para evitar danos à córnea. Fixe a cabeça com um pequeno pedaço de fita adesiva para evitar movimento durante a digitalização.
- Coloque uma almofada de pressão sob o tórax do rato para monitorar a respiração e cubra o rato com um cobertor de aquecimento de água morna circulante e plástico bolha para manter o rato aquecido. Antes da varredura, verifique o monitor respiratório para garantir que o sinal esteja claro sem ruído e que o ciclo respiratório seja consistente. Reposicione a almofada de pressão, se necessário.
NOTE:<span style='font-family:Arial,sans-serif; tamanho da fonte:12pt; estilo da fonte:normal; variante de fonte: normal; peso da fonte: 400; decoração de texto:nenhuma; alinhamento vertical:linha de base; espaço em branco: pré-encapsulamento;' > A frequência respiratória deve ser mantida entre 1 respiração por 1.200 a 1.700 ms, ajustando o nível de anestesia entre 1% e 2%. - Deslize a bobina de volume em quadratura sobre a cabeça. Ajuste os capacitores de sintonia e correspondência da bobina para a frequência e impedância adequadas de acordo com as instruções fornecidas pelo fornecedor da bobina. Avance a base do scanner no orifício do scanner para iniciar a digitalização.
- Obtenha uma varredura padrão de reconhecimento de três aviões ("tripilot") para garantir o posicionamento correto.
- Carregue a sequência tripilot no Controle de Varredura clicando em Nova Varredura e selecionando a sequência tripilot na lista de protocolos. Em seguida, clique no botão traffic light botão para iniciar a verificação.
- Quando a varredura terminar, carregue a varredura na tela da imagem e certifique-se de que 1) a cabeça esteja reta e 2) o cérebro esteja posicionado no centro do ímã e da bobina. Ajuste a posição da cabeça e/ou do leito do scanner, se necessário, e adquira uma nova varredura tripilot.
- Ajuste o campo magnético local usando um protocolo automatizado de calço de segunda ordem: carregue o protocolo de calço de segunda ordem no controle de varredura conforme descrito na etapa 1.5.1. Em seguida, clique no Acq tab | Current Adjustments | Ajuste específico do método para a Homogeneidade do campo local na ferramenta de controle do espectrômetro para iniciar o calço automatizado.
- Carregue uma nova sequência de imagens rápidas T2 com ecos refocados (RARE) no controle de varredura, conforme descrito na etapa 1.5.1.
- Adquira imagens ponderadas T2 usando as configurações padrão, exceto para os seguintes parâmetros:
- Abra o Edit Scan tab e ajuste o tempo de repetição (TR) e o tempo de eco (TE) para 5.500 ms e 37 ms, respectivamente. Além disso, modifique o campo de visão e o tamanho da matriz para permitir uma resolução no plano mais alta de 109 μm x 109 μm (resolução padrão = 156 μm x 156 μm). Certifique-se de que a espessura da fatia seja de 600 μm, o número de fatias seja definido como 45 e o fator RARE seja definido como 8.
- Abra o Editor de geometria e coloque o pacote de fatias na posição correta, incluindo o bulbo do cérebro e o cerebelo.
- Carregue três novas sequências spin-eco ponderadas por difusão ecoplanar (DtiEpi) da pasta B_DIFFUSION para o protocolo de controle de varredura, conforme descrito na etapa 1.5.1.
NOTE:<span style='font-family:Arial,sans-serif; tamanho da fonte:12pt; estilo da fonte:normal; variante de fonte: normal; peso da fonte: 400; decoração de texto:nenhuma; alinhamento vertical:linha de base; espaço em branco: pré-encapsulamento;' > Usando três "conchas" de difusão diferentes, o modelo de imagem de tensor de difusão (DTI), o modelo de imagem de curtose de difusão (DKI) e o modelo de integridade do trato da substância branca (WMTI) podem ser estimados. Recomenda-se usar pelo menos três valores b diferentes, com o valor b mais alto tendo no máximo 3000 s/mm2 com pelo menos 15 direções uniformemente espaçadas por invólucro de imagem.- Adquira imagens ponderadas por difusão (DWIs) usando as configurações padrão, além das seguintes configurações:
- Abra o Edit Scan guia e ajuste os parâmetros geométricos na guia Geometry guia. Ajuste o campo de visão e o tamanho da matriz para 105 x 105 para garantir uma resolução de 333 μ m x 333 μm.
- Defina a orientação da fatia como axial e o número de fatias como 25, resultando em uma espessura de fatia de 500 μm e distância entre fatias de 600 μm. Altere a direção de leitura para a direita.
- Clique no Contrast guia para ajustar o tempo de eco para 24 ms e o tempo de repetição para 6.250 Ms.
- Defina a largura de banda para 250.000 Hz e ative a supressão de gordura. Ajuste o número de médias para um.
- Clique no Research e altere o número de médias (segmentos EPI) para 4.
- Clique no Diffusion guia na guia pesquisa. Execute esta etapa separadamente para cada uma das três conchas de difusão.
- Ajuste o número de direções de difusão para 32 para o primeiro shell, 46 para o segundo shell e 64 para o terceiro shell.
- Ajuste as direções do gradiente com arquivos de direções de gradiente personalizados.
- Altere o número de imagens B0 para 5 para o primeiro shell, 5 para o segundo shell e 7 para o terceiro shell.
- Ajuste o valor b por direção para 800 s/mm2 para o primeiro shell, 1500 s/mm2 para o segundo shell e 2000 s/mm2 para o terceiro shell.
NOTE:<span style='font-family:Arial,sans-serif; tamanho da fonte:12pt; estilo da fonte:normal; variante de fonte: normal; peso da fonte: 400; decoração de texto:nenhuma; alinhamento vertical:linha de base; espaço em branco: pré-encapsulamento;' > O ajuste das direções do gradiente com um arquivo de direções de gradiente personalizado pode ser feito manualmente definindo Enter Diffusion Directions para sim ou automaticamente usando a macro DTI_SET_DIRECTIONS.
- Abra o Editor de geometria e coloque o campo de visão entre o bulbo e o cerebelo, contendo apenas o cérebro para reduzir o artefato e o tempo de varredura. Posicione seis bandas de saturação de 5 mm fora do cérebro para reduzir os artefatos clicando em Saturation e deslize as bandas na posição preferida usando as barras de rolagem.
NOTE:<span style='font-family:Arial,sans-serif; tamanho da fonte:12pt; estilo da fonte:normal; variante de fonte: normal; peso da fonte: 400; decoração de texto:nenhuma; alinhamento vertical:linha de base; espaço em branco: pré-encapsulamento;' > O bulbo e o cerebelo podem ser identificados com base em pontos anatômicos e nas três imagens da varredura tri pilot.
- Adquira as sequências importadas clicando no traffic light símbolo. Usando as configurações dos parâmetros descritos acima, o tempo de aquisição da varredura T2-RARE é de 12 min, do primeiro shell DWI 15 min, do segundo shell DWI 21 min e do terceiro shell 30 min. O tempo total de aquisição é de aproximadamente 80 min (em um único sistema de canal receptor).
- Após a conclusão do protocolo de digitalização, retire o animal da base do scanner e coloque-o numa gaiola limpa com uma almofada de aquecimento a 37 °C. Devolva o animal à gaiola de origem quando recuperar a consciência.