Monitoramento morfológico e fisiológico de esferoides tumorais por meio de tomografia de coerência óptica

Resumo

Source: <a style='text-decoration:none;' href='https://app.jove.com/v/59020/longitudinal-morphological-physiological-monitoring-three-dimensional'>Huang, Y. et. al., Monitoramento morfológico e fisiológico longitudinal de esferoides tumorais tridimensionais usando tomografia de coerência óptica. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo demonstra o uso da tomografia de coerência óptica (OCT) para monitorar esferoides tumorais em uma placa de vários poços, capturando imagens transversais de alta resolução. Ao analisar os reflexos de luz das estruturas celulares, a OCT constrói modelos 3D para avaliar características morfológicas, como tamanho e forma, ao mesmo tempo em que distingue células viáveis de não viáveis com base nas mudanças de dispersão de luz ao longo do tempo.

Protocolo

1. Preparação de células

Resultados

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Sistema de imagem OCT de domínio espectral personalizado			Desenvolvido em nosso laboratório
}Diodo superluminescente (SLD)	Thorlabs	SLD1325	Fonte de luz
2×2 acoplador de fibra fundida monomodo, 50:50:50 50 taxa de divisão	AC Photonics	WP13500202B201
Braço de referência
Tubo de lente	Thorlabs
Thorlabs
Lente de colimação	Thorlabs	AC080-02 0-C
Lente de focagem	Thorlabs
Thorlabs
Mirror	Thorlabs
Thorlabs
Thorlabs
Poste pedatrial	Thorlabs
Garfo de fixação	Thorlabs
Braço de amostra
Tubo de lente	Thorlabs
Adaptador	Thorlabs
Lente colimadora	Thorlabs	AC080-020-C
Galvanômetro	Thorlabs{TAG_195{}} }}
Lente de relé	Thorlabs	AC254-100-C	Lente de dois relé para fazer um telescópio setup
Montagem de espelho triangular	Thorlabs
Mirror	Thorlabs
Objetivo	Mitutoyo		{{ TAG_239}}
Poste de pedestal	Thorlabs
Garfo de fixação
Controlador de polarização	Thorlabs		{{ TAG_269}}
Montagem de gaiola de 30 mm	Thorlabs
Vara de gaiola	Thorlabs
Stage			{{ TAG_299}}
Estágio de tradução motorizado 3D	Beijing Mao Feng Optoelectronics Technology Co., Ltd.	JTH360XY
2D Estágio de inclinação		}	}
Estágio de rotação	{{TAG_ 325}}
Suporte de placa			Impresso em 3D
Espectrômetro
Tubo de lente	Thorlabs{{TAG_ 355}}
Adaptador	Thorlabs
Lente colimadora	Thorlabs	AC080-020-C
Grade	Wasatch	G = 1145 lpmm
Lente F-theta	Thorlabs	FTH-1064-100
Câmera de varredura de linha InGaAs	Sensor Ilimitado	SU1024-LDH2
Componente de Cultura de Células{{TAG_ 414}}
HCT 116 Linha celular	ATCC	CCL-247
Frasco de cultura de células	SPL Life Sciences	70025
Pipeta	Fisherbrand	14388100
Pontas de pipeta	Sorenson Bioscience	10340
Gibco GlutaMax DMEM	Thermo Fisher Scientific	10569044
Soro fetal bovino, certificado, origem americana	Thermo Fisher Scientific	16000044
Antibiotico-antimicótico (100X)	Thermo Fisher Scientific	15240062
Acessório ultrabaixo de fundo redondo transparente de 96 poços Corning microplaca	Corning	7007
Gibco PBS, pH 7.4	Thermo Fisher Scientific	10010023
Gibco Tripsina-EDTA (0,5%)	Thermo Fisher Scientific	15400054
Forma Série II 3110 Incubadora de CO2} incubadora	Thermo Fisher Scientific	3120
Luvas	VWR	89428-750
Parafilm	Sigma-Aldrich{{ TAG_555}}	P7793
Pipetas de transferência	Globe Scientific	138080	{{TAG_569 }}
Centrífuga	Eppendorf	5702 R	Para centrifugar o tubo de 15 mL
Centrífuga{{ TAG_583}}	NUAIRE	AWEL CF 48-R	Para centrifugar a placa de 96 poços
Microscópio	Olympus
Lista de PTU Comerciais
Sistema SD-OCT	Thorlabs	Série Telesto
Wasatch Photonics	WP OUT 1300 nm
Software para Análise de Dados{{TAG_ 637}}
Análise Básica de Imagens	NIH	ImageJ	Fiji também funciona.
Renderização 3D	Thermo Fisher Scientific	Amira	Software comercial. Opção 1
Renderização 3D	Bitplane	Imaris	Software comercial. Opção 2. Usado no protocolo
Software de aquisição OCT			desenvolvido sob medida em C++.
Controle de palco	Beijing Mao Feng Optoelectronics Technology Co., Ltd.	MRC_3	Incorporado ao código de aquisição de OCT personalizado
Software de processamento de OCT			Desenvolvido sob medida em C++. Utilize GPU. Incorporado ao código de aquisição personalizado da OCT.
Análise Morfológica e Fisiológica			Desenvolvido sob medida em MATLAB

{{ TAG_62}}Adaptador{{TAG_ 92}}Montagem de espelho cinemático{TAG_112}}1D Estágio Translacional{{ TAG_122}}Filtro de densidade neutra contínua{TAG_136{ }} {{ TAG_151}}{TAG_166{ }} {{TAG_ 181}}{{TAG_254{ }}Thorlabs{TAG_331}}{{TAG_340} }{{{TAG_ 386}} {{TAG_400 }}{TAG_422}}{TAG_432}}{{TAG_ 473}}{TAG_520}} {{TAG_540 }}{{ TAG_610}} {TAG_624}} Sistema SD-OCT