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Todos os procedimentos envolvendo amostras de animais foram revisados e aprovados pelo comitê de revisão ética animal apropriado.
1. Imagem
1. Coloque as lâminas na interface de varredura de infravermelho próximo com o tecido voltado para baixo. Crie uma imagem de uma lâmina de vidro ou várias lâminas de cada vez usando uma ferramenta de seleção.
2. A imagem desliza usando a configuração de qualidade mais alta com um deslocamento de 0 nm e uma resolução de 21 μm. A varredura normalmente leva de 13 a 19 horas, dependendo do equipamento de varredura usado.
3. Importe imagens para o software de análise de imagem (por exemplo, Image Studio) para visualizar e marcar a proteína semiquantitativa análise.
2. Análise de expressão de proteína
1. Abra o software de análise de imagem e selecione o Work Area no qual a imagem foi digitalizado.
2. Abra a imagem digitalizada no software de análise de imagem para visualizar a digitalização e ajuste também quais comprimentos de onda são visualizados como o contraste, brilho e ampliação mostrados sem alterar a imagem bruta ou a emissão quantificada total.
3. Identifique as regiões-chave para quantificação e selecione o Analysis tab na parte superior da página e selecione Draw Rectangle (ou Draw Ellipse/ Draw Freehand) para desenhar um retângulo sobre a área que será quantificada.
4. Para visualizar o tamanho do retângulo, selecione Shapes ao longo do canto inferior esquerdo da tela, em seguida, selecione Columns no canto inferior direito. Adicione Height e Width colunas para identificar o tamanho da forma.
OBSERVAÇÃO: É importante controlar o tamanho da forma ao comparar a quantificação. Recomenda-se usar formas idênticas colocadas no local de quantificação desejado, a fim de obter uma amostragem precisa das emissões para essa região.
5. Em seguida, nomeie a forma e repita. Depois que todas as regiões são amostradas, os dados disponíveis no columns tab pode ser agregado e analisado.