Imagem de bioluminescência em um modelo de camundongo EAE

Resumo

Source: Schmitz, K., et al., Bioluminescência e Imagem de infravermelho próximo de neurite óptica e inflamação cerebral no modelo EAE de esclerose múltipla em camundongos. J. Vis. exp. (2017).

Este vídeo demonstra o método para visualizar e monitorar a Encefalomielite Autoimune Experimental ou inflamação induzida por EAE no nervo óptico usando imagem de bioluminescência. Inclui o posicionamento do mouse, a injeção de reagentes e a captura de imagens sequenciais para monitorar as mudanças na bioluminescência ao longo do tempo.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo veterinário JoVE conselho de revisão.

1. Imagem Bioluminescente de Neurite Óptica e Inflamação Cerebral

1. Configuração do sistema de imagem
   1. Realize imagens in vivo com qualquer equipamento que permita a análise de sinais de bioluminescência e infravermelho próximo.
   2. Mantenha os camundongos sob anestesia com isoflurano de 2 a 2,5% durante todos os procedimentos de imagem.
   3. Posicione um ou dois mouses um ao lado do outro no aparelho usando os suprimentos de gás do meio. Posicione a parte superior da coluna no centro.
   4. Para avaliar os efeitos da medicação, compare pares de camundongos usando dois camundongos simultaneamente, um por grupo. Isso é importante para imagens bioluminescentes.
   5. Proteja o local da imunização com um pano preto e tire uma fotografia e uma imagem de linha de base para avaliar o posicionamento correto do camundongo / camundongos. Para todas as imagens, utilize a focagem B a uma distância de 6,5 cm da câmara.
2. Injeção e imagem de sonda de inflamação bioluminescente
   1. Use o in vivo configurações do sistema de imagem: Epi-BLI, filtro Em aberto, Bloco de filtro Ex, fstop 1, binning 8, foco B = 6,5 cm, exposição do anúncio 120 s; tire uma imagem de linha de base.
   2. Injetar 100 μL i.p. do reagente quimioluminescente pronto para uso (40 mg/mL). Misture bem antes de encher a seringa.
   3. Capture imagens de bioluminescência 5, 10 e 15 minutos após a injeção. O curso de tempo do pico bioluminescente difere entre os animais.
      NOTA: O pico ocorrerá 5 a 10 minutos após a injeção; Um declínio em 15 min indica que não são necessárias mais imagens. Use pares de camundongos de grupos de controle e tratamento para eliminar pequenos vieses devido a diferentes cursos de tempo.
   4. Preencha as descrições relevantes para o experimento. Observe uma caixa de diálogo pop-up automaticamente; inclui informações, como tensão do mouse, sexo, ponto de tempo, hora da injeção da sonda, grupo, etc. Salve todos os arquivos em uma pasta; eles terão etiquetas de tempo e todas as descrições.

Materiais