Imagem de fotoativação de fluorescência do transporte de neurofilamentos em axônios mielinizados de camundongos

Resumo

Source: Boyer, N. P. et. al., Imagem e análise do transporte de neurofilamentos no nervo tibial de camundongo excisado. J. Vis. Exp. (2020)

Este vídeo demonstra o método de fotoativação por fluorescência para analisar o transporte de neurofilamentos em axônios mielinizados de nervos periféricos. Ao rastrear neurofilamentos marcados com fluoróforo verde fotoativado, a técnica fornece informações sobre o transporte axonal em doenças neurodegenerativas.

Protocolo

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p style='line-height:1.38000000000000001;margin-bottom:0pt;margin-top:0pt;text-align:justify;' dir='ltr'>Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

Resultados

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
14 x 22 Junta retangular 0.1mm	Bioptechs	1907-1422-100	Inner gasket
2-desoxi-D-glicose	Sigma	D6134
30mm Junta redonda com furos	Bioptechs	1907-08-750	Outer gasket
35 x 10 mm prato	Thermo Fisher	153066	Dissection dishes
lamínulas redondas de 40 mm	Bioptechs	40-1313-0319
Seringa de 60mL - Ponta Luer-lock	BD	309653
Andor Revolution WD sistema confocal de disco giratório	Andor		Equipado com sistemas Perfect Focus e FRAPPA
Cloreto de cálcio	Fisher	C79
Coverslips	Fisher	12-541-B	Para slide de fluoresceína
D-(+)-glucose solution	Sigma	G8769
Dissecando pinos	Fine Science Tools	26001-70
Pinça de dissecação	Fine Science Tools	11251-30	Pinça de ponta fina
Dissection microscope	Zeiss	47 50 03
Panela de dissecação com cera	Ginsberg Scientific	568859
Tesoura de dissecação	Fine Science Tools	14061-09	Tesoura de dissecção inicial
FCS2 câmara de perfusão	Bioptechs	60319-02-03
Fluoresceína sódica	Fluka	46960
Inline solution heater	Warner Instruments	SH27-B
Pinça de laminectomia	Fine Science Tools	11223-20	Pinça de dissecção inicial
Sulfato de magnésio	Sigma-Aldrich	M7506
Microaqueduct	Bioptechs	130119-5
Lâminas de microscópio	Fisher	12-544-3	Para slide de fluoresceína
Inserção do estágio do microscópio	Applied Scientific Instrumentation	I-3017
Sistema de aquecimento objetivo	Okolab		Oko Touch com colarinho objetivo
Objective oil - type A	Nikon	descontinuado
Plan Apo VC 100x 1.40 NA objetivo	Nikon	MRD01901
Cloreto de potássio	Fisher	P217
Fosfato de potássio	Sigma-Aldrich	P0662
Bicarbonato de sódio	Sigma-Aldrich	S6297
Cloreto de sódio	Sigma-Aldrich	S7653
Bomba de seringa	Sage Instruments	Model 355
Adaptador de tubulação - fêmea	Small Parts Inc.	1005109
Adaptador de tubulação - macho	Small Parts Inc.	1005012
Tubulação Tygon	Bioptechs		ID de 1/16", espessura da parede de 1/32<
Vannas spring scissors	Ferramentas de ciências finas	15018-10	fine scissors

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