Uma técnica para aspiração e processamento percutâneo de espermatozóides epidídimos

Resumo

Este vídeo demonstra a aspiração percutânea de espermatozóides do epidídimo de um paciente com azoospermia, uma condição caracterizada pela ausência de espermatozóides no sêmen. O procedimento envolve a desinfecção da área escrotal, aspiração do líquido epididimal usando uma seringa com uma solução de cultura especializada e processamento da amostra coletada para isolar espermatozóides viáveis. Os espermatozóides preparados estão prontos para uso em procedimentos avançados de tratamento de infertilidade.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo participantes humanos foram realizados em conformidade com as normas institucionais, nacionais e diretrizes internacionais para o bem-estar humano e foram revisadas pelo Conselho de Revisão Institucional local.

1. Preparação pré-operatória

1. Preparação de suprimentos cirúrgicos
   1. Prepare os suprimentos necessários para o procedimento cirúrgico, incluindo um pacote de instrumentos cirúrgicos, duas seringas de 5 mL equipadas com uma agulha de 0,7 mm (0,7 x 32 Thin Wall Long Bevel (TWLB)), solução desinfetante de 60 mL, dois pares de luvas de borracha estéreis e um curativo adesivo estéril.
   2. Peça às enfermeiras que examinem a embalagem dos instrumentos cirúrgicos submetidos à esterilização a vapor de alta pressão quanto a qualquer dano ou validade. Uma vez confirmado que está livre de problemas, coloque-o na mesa de instrumentos e abra a camada externa.
   3. Para os andrologistas: coloque luvas de borracha estéreis e abra a camada interna da embalagem dos instrumentos cirúrgicos para verificar se a fita indicadora de esterilização está qualificada ou não, bem como garantir que todos os instrumentos internos estejam completos.
   4. Prepare duas seringas de 5 mL equipadas com agulhas de 0,7 mm (0,7 x 32 TWLB) para anestesia e cirurgia e, em seguida, abra a ampola contendo a injeção de lidocaína.
   5. Utilize uma seringa estéril de 5 mL para aspirar a injeção de lidocaína, eliminando posteriormente as bolhas de ar da seringa.
2. Preparação do paciente submetido a cirurgia
   1. Organize a preparação da pele para o paciente. Depile os púbis do períneo usando uma lâmina descartável e lave o períneo e a pele ao redor com água e sabão para garantir que não haja excesso de púbis ou manchas.
   2. Posicione o paciente na mesa de operação em posição de litotomia, remova as calças e prenda a roupa superior acima do umbigo para expor totalmente o períneo e a parte inferior do abdômen abaixo do umbigo.
   3. Ajuste o ângulo da lâmpada sem sombras para iluminar o escroto do paciente.
   4. Utilize uma pinça oval para segurar uma bola de gaze estéril, que é totalmente imersa em solução desinfetante para iniciar o processo de desinfecção. Realize a desinfecção da pele da periferia ao escroto na seguinte ordem: abdômen inferior, frente e parte interna das coxas, área perineal, pênis e escroto.
   5. Após a desinfecção inicial, substitua a bola de gaze estéril e repita o processo de desinfecção. Após três rodadas de desinfecção, o processo de desinfecção pré-operatória é concluído.
   6. Inicie o processo de colocação de toalhas estéreis após a conclusão da desinfecção. Primeiro, coloque uma toalha quadrada estéril sob as nádegas do paciente e, em seguida, espalhe uma toalha estéril ao redor da área cirúrgica e seus arredores, expondo totalmente o escroto na área do orifício.
3. Preparação da solução de cultura G-MOPS-PLUS
   1. Peça aos técnicos da sala de cultura embrionária para transferir aproximadamente 2 mL de solução de cultura G-MOPS-PLUS para a placa de cultura usando uma pipeta Pasteur estéril. Feche adequadamente a tampa e, posteriormente, entregue-a à enfermeira na sala de cirurgia pela janela de transferência.
   2. Coloque o prato de cultura sobre a toalha estéril na mesa de instrumentos e abra a tampa.
   3. Usando outra seringa de 5 mL, aspire aproximadamente 0,2 mL de solução de cultura G-MOPS-PLUS e, posteriormente, remova as bolhas de ar para utilização futura.

2. Anestesia e cirurgia

1. Para os andrologistas: segure a seringa cheia de injeção de lidocaína na mão direita enquanto fixa o cordão espermático do paciente com a mão esquerda. Punção subcutânea e injete uma pequena quantidade de lidocaína para formar uma pápula. Em seguida, puncionar por via subcutânea e aprofundar no tecido do cordão espermático, iniciando a injeção de aproximadamente 0,5 mL de lidocaína após a confirmação de que não há retorno de sangue. Para obter um melhor efeito da anestesia do bloqueio do cordão espermático, mude a direção da agulha de injeção 2 a 3 vezes no mesmo ponto de punção e repita a operação de injeção de lidocaína no cordão espermático.
2. Segure o escroto do paciente com a mão esquerda, prendendo o epidídimo que requer punção. Palpando, confirme a localização do epidídimo onde a punção cirúrgica é necessária usando a mão direita. Em seguida, segure a seringa contendo lidocaína mencionada acima e injete-a sob a pele no local da punção para obter anestesia de infiltração local.
3. Segure o escroto do paciente com a mão esquerda, prendendo o epidídimo que requer punção. Em seguida, segure a seringa de 5 mL contendo a solução de cultura G-MOPS-PLUS (0,2 mL) na mão direita e puncione perpendicularmente à pele, penetrando no tecido epididimal. Mantenha a pressão negativa na seringa e puncione repetidamente o tecido epididimal para que o fluido epididimal entre pela agulha sob o efeito da pressão negativa.
4. Continue a manter a pressão negativa e retire lentamente a agulha de punção. Injete o líquido epididimal extraído na placa de cultura. Depois de completar a injeção, aspire a solução de cultura G-MOPS-PLUS próxima para enxaguar a seringa a fim de maximizar a quantidade de fluido epididimal coletado injetado na placa de cultura.

3. Tratamento de espécimes cirúrgicos

1. Pesquisa e observação de espermatozóides epididimais
   1. Transfira a placa de cultura contendo o fluido de cultura G-MOPS-PLUS e o fluido epididimal para o técnico de laboratório de embriões através da janela de transferência.
   2. Os técnicos da sala de cultura embrionária assumem o controle da placa de cultura e a colocam no palco de um microscópio óptico invertido, prendendo-a. Ligue o interruptor de alimentação do microscópio e gire o botão de ajuste de luz para uma intensidade de luz apropriada.
   3. Gire o conversor do microscópio óptico invertido, selecione a lente objetiva de 10x, gire as espirais de foco grosso e fino para ajustar a distância focal. Observe a situação de foco e procure espermatozóides epididimais ao microscópio.
   4. Continue a girar o conversor do microscópio invertido para a lente objetiva de 40x, gire a espiral de foco fino para ajustar a distância focal e observe os espermatozóides epididimais campo por campo. Avalie o número e a qualidade dos espermatozóides do epidídimo. Pode-se ver que os espermatozóides normais do epidídimo amadureceram e obtiveram a capacidade de se mover.
2. Tratamento de espermatozóides epididimais
   1. Ao observar espermatozóides epididimais ativos suficientes, transfira o líquido da placa de cultura para um tubo de centrífuga de 15 mL através de uma pipeta Pasteur estéril.
   2. Coloque o tubo de centrífuga acima na bandeja de equilíbrio e use um tubo de centrífuga da mesma especificação contendo água estéril para nivelar.
   3. Abra a porta da centrífuga, coloque os tubos da centrífuga no slot de cartão simetricamente e, em seguida, feche a porta da centrífuga. Defina a força centrífuga para 500 x g e o tempo de centrifugação para 5 min através do controle painel. Pressione o botão START botão no painel de controle para iniciar a centrifugação processo.
   4. Após a conclusão do processo de centrifugação, abra a porta da centrífuga e remova o tubo da centrífuga que contém o fluido epididimal. Desaperte a tampa, aspire suavemente o sobrenadante com uma pipeta Pasteur estéril e descarte o sobrenadante retirado.
   5. Utilizando uma pipeta Pasteur estéril, transfira aproximadamente 2 mL de solução de cultura G-IVF-PLUS para o tubo da centrífuga. Em seguida, pipete suavemente a solução no tubo de centrifugação para ressuspender completamente.
   6. Repita os processos de balanceamento, centrifugação e remoção da camada superior de líquido.
   7. De acordo com as necessidades de injeção intracitoplasmática de espermatozóides (ICSI), transfira aproximadamente 0,5 mL de solução de cultura G-IVF-PLUS para o tubo de centrífuga utilizando uma pipeta Pasteur estéril e sopre suavemente os espermatozóides epididimais no fundo do tubo de centrífuga para torná-lo completamente suspenso.
   8. Use os espermatozóides epididimais completamente suspensos diretamente para o processo ICSI.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Centrifuge	Origio MAXI	G123511110440	Max RPM: 4000; RCF máximo: 2826 x g
Centrifuge tube	Falcon	352095	15 mL
Combinação de tubo de ensaio stand	Shenzhen Zhicheng Long Technology Co., LTD	None
Culture dish	Falcon	353001	35 mm x 10 mm
Solução desinfetante	Shanghai Likang Disinfection high-tech Co., LTD	20230801S	60 mL
G-IVF PLUS	Vitrolife Suécia AB	511574	solução de cultura para tratamento de fluidos epididimais
G-MOPS PLUS	Vitrolife Sweden AB	511712	solução de cultura para operação de punção
Pipetas Pasteur de embriões de alta segurança	Darwin	D2208003	230 mm, Fire Polished
instrument table		DZ202012010
Microscópio óptico invertido	OLYMPUS		IX71
Lidocaine hydrochloride injection		H31021072	5 mL: 0.1 g
Medical balance	Shanghai Guangzheng Medical Instrument Co., LTD	201609-4854	JYT-2
Máscaras cirúrgicas médicas	Fábrica de materiais de saúde Haozheng do distrito de Panyu da cidade de Guangzhou	161220328	17.5×9.5 cm(unfold size 17.5×17 cm)
Tabela de operação motorizada	Shandong Mingtai Medical Equipment Co., LTD	YZB0089-2011	operation table
Self-Adhesive Wound Dressing	Guangzhou Ya Tian Biological Technology Co., LTD	20142140348	6 cm x 7 cm(3 cm x 4 cm)
Seringas hipodérmicas estéreis para uso único	Shandong Weigao Group Medical polymer Products Co., LTD	20230921	5 mL, equipado com um 0.7mm (0.7 x 32TWLB)
Pó estéril livre de látex luva cirúrgica<	2023030322	71/2, 61/2<
Surgical instruments package	Departamento de Suprimentos do Terceiro Hospital Afiliado da Universidade Sun Yat-sen	10228376	autoclave sterilization
Surgical light	Shanghai Jishun Medical Device Manufacturing Co., LTD	JSL2009-160D
Vertical flow clean table	Suzhou Wanda Purification Technology Co., LTD	DS-CZ-1311006	SH-CJ-2FD-1500

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