Fator de crescimento nervoso encapsulante em nanopartículas que imitam lipoproteínas de alta densidade

Resumo

Fonte: Zhu, J., et. al., Preparação e Caracterização de Novas Nanopartículas que Mimetizam HDL para Encapsulamento do Fator de Crescimento Nervoso. J. Vis. Exp. (2017)

Este vídeo demonstra a montagem passo a passo de nanopartículas que imitam HDL carregadas com NGF usando encapsulamento assistido por protamina e automontagem à base de lipídios para possíveis aplicações de entrega neurotrófica.

Protocolo

1. Preparação de nanopartículas que imitam NGF HDL

1. Dissolva os excipientes, fosfatidilcolina (PC), esfingomielina (SM), fosfatidilserina (PS), oleato de colesterol (CO) e succinato de polietilenoglicol D-α-tocoferol (TPGS), em etanol para preparar soluções estoque a 1 mg/mL.
   NOTA: As soluções estoque foram aliquotadas e armazenadas a -20 °C. O oleato de colesterol foi armazenado em frascos escuros. As soluções estoque de PC, SM, PS e CO permaneceram estáveis por até 6, 3, 12 e 12 meses, respectivamente, a -20 °C. A solução TPGS foi estável por pelo menos 12 meses a -20 °C.
2. Misture 10 μL de NGF (1 mg/mL em água) com 10 μL de protamina USP (1 mg/mL em água) em um tubo de microcentrífuga de 1,5 mL e deixe repousar por 10 min em temperatura ambiente para formar o complexo.
   NOTA: As soluções estoque de NGF e protamina foram aliquotadas e armazenadas a -20 °C. Congelamento e descongelamento repetidos não são recomendados para o estoque de NGF.
3. Adicione 59 μL de PC, 11 μL de SM, 4 μL de PS, 15 μL de CO e 45 μL de TPGS a um frasco de vidro. Misture e evapore o etanol sob um fluxo suave de nitrogênio por cerca de 5 min; Todos os excipientes devem formar uma película fina e oleosa no fundo do frasco para injetáveis de vidro.
4. Adicione 1 mL de água ultrapura (tipo 1) ao frasco e homogeneize a 9.500 rpm (8.600 x g) por 5 min em temperatura ambiente para formar as nanopartículas protótipo (NPs).
5. Adicionar o complexo preparado no passo 1.2 aos NP protótipos e incubar a 37 °C durante 30 minutos com agitação utilizando uma pequena barra de agitação no frasco para injetáveis de vidro.
6. Resfrie os NPs mexendo em temperatura ambiente por mais 30 min. Depois que isso esfriar, adicione 106 μL de Apo A-I (1,49 mg / mL) e mexa em temperatura ambiente durante a noite para formar os NPs finais que imitam NGF HDL.

Materiais