Injeção estereotáxica de vetores virais para reprogramação de células gliais em modelo de camundongo

Resumo

Fonte: Pereira, M. et. al., Reprogramação direta in vivo de células gliais residentes em interneurônios por injeção intracerebral de vetores virais. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo demonstra a injeção estereotáxica de um vírus adeno-associado no córtex cerebral de um camundongo transgênico para fornecer reprogramação neuronal dependente de Cre e genes repórteres fluorescentes em células gliais.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Injeção de fatores de reprogramação na

1. configuração do cérebro animal, colocação estereotáxica e perfuraçãoNOTA: Este protocolo se concentra no uso de Ascl1, Lmx1a e Nurr1 (ALN) para a reprogramação da glia NG2 (Neurônio-Antígeno Glial 2) em interneurônios. Em nossa experiência, interneurônios de um fenótipo semelhante podem ser obtidos usando outras combinações de fatores
   1. Mova o braço M/L-D/V da estrutura estereotáxica para o lu....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Modelo
NG2-Cre camundongos	Jackson	NG2-CrexB6129, Reagentes
Água
salina	Apoteket AB		70%
Etanol	Solveco
Isolfurano	Apoteket AB		Diluir a solução a 1% com água
morna Virkon	Viroderm	7511
Pentobarbital	Apoteket AB	P0500000	i.p. para procedimento terminal na dose de 60 mg/ml
Sacarose	Merck	S0389-500G
Trypan Blu	Thermo Fisher Scientific	15250061
Retrobeads	Lumafluor	R170
Buprenorfina	Apoteket AB
Equipamentos			De RSG Solingen
Tesoura	VWR	233-1552	Da Biochem
Pinças	VWR	232-0007
Pinça	VWR	232-0120
Porta-bisturi	VWR	RSGA106.621	Número 20
Bisturi	VWR	RSGA106.200
Quadro estereotáxico	Stoelting Europe	51500D
Barras de orelha de rato	Stoelting Europe	51648	5 ul
Seringa com agulha removível	Hamilton Company	65	0,75 diâmetro interno e 1,5 diâmetro externo.
Copos de vidro	Stoelting	50811
Extrator capilar de vidro	Sutter company	P-1000
Broca odontológica	Agnthos AB	1464
Barbeador	Agnthos AB	GT420
Câmara e bomba de isoflurano	Agnthos AB	8323101	Seringas de 2 mL
	Merck	Z118400-30EA	25G
Agulhas	Merck	Z192414 Aldrich
Mouse e adaptador de rato neonatal para estrutura estereotáxica	Stoelting	51625
Almofada de aquecimento	Braintree scientific, inc	53800M
Gaze de algodão	Fisher Scientific	22-037-902
Tubo de borracha	Elfa Distrelec	HFT-A-9.5 / 4.8 PO-X BK 150
Cotonetes	Fisher Scientific	18-366-473

animal de estoque #008533