Tratamento intracerebroventricular com resiniferatoxina para dessensibilização de TRPV1 no cérebro de camundongos

Resumo

Fonte: Fukushima, A., et al. Tratamento Intracerebroventricular com Resiniferatoxina e Testes de Dor em Camundongos. J. Vis. Exp. (2020)

Este vídeo demonstra o procedimento de injeção intracerebroventricular de resiniferatoxina em camundongos para dessensibilizar os receptores TRPV1 no cérebro.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Injeção intracerebroventricular de RTX

1. Anestesiar camundongos com sal de sódio pentobarbital (60 mg/kg, por via intraperitoneal) e verificar se há perda do reflexo de endireitamento.
2. Para o tratamento intracerebroventricular (i.c.v.), injete 5 μL de resiniferatoxina (RTX) (20 μg/mL) no ventrículo lateral direito. Para o grupo de controle, injete o veículo (etanol a 10%, monooleato de sorbitano a 10% de polioxietileno (20) e líquido cefalorraquidiano artificial a 80% (FCA)) da mesma maneira.
   1. Passe uma agulha descartável de 27 G por um tubo de metal (0,8 mm de diâmetro interno) para expor a ponta de 3,0-3,5 mm da agulha (Figura 1A).
   2. Desinfete a cabeça do camundongo com álcool 70% e segure os ossos esquamosais do camundongo firmemente com os dedos (Figura 1B). nota: Preste atenção às posições das saliências esquamosais, pois essas saliências servirão como pontos de referência para injeção.
   3. Mova a agulha lateralmente no couro cabeludo e encontre a sutura sagital enquanto a ponta da agulha é enganchada na sutura.
   4. Mova a ponta cerca de 1 mm para a direita, depois mova a ponta rostralmente e encontre a sutura coronal. (Figura 1B).
   5. Insira a agulha lenta e verticalmente, injete a solução RTX em cerca de 10 segundos e segure-a por cerca de 10 segundos.
   6. Retire a agulha lentamente e retorne o mouse à sua gaiola inicial. O sangramento geralmente é mínimo ou ausente. Se ocorrer sangramento importante, o uso de outro camundongo deve ser considerado.

Resultados

Figura 1: Vistas fotográficas e esquemáticas da injeção intracerebroventricular (i.c.v.). (A) Agulha usada para injeção i.c.v. (B) Esquema do crânio do rato e o movimento da ponta da agulha. Os ossos esquamo...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Resiniferatoxin	LKT Laboratories	R1774	usado para pré-tratamentos s.c./i.c.v. e o teste RTX
Sal de sódio Pentobarbital	Tokyo Chemical Industry	P0776	usado para anestesia
Etanol (99,5%)	Wako Pure Chemical Industries	057-00456	usado para dissolver o
monooleato de sorbitano de polioxietileno (20)	Wako Pure Chemical Industries	161-21621	usado para dissolver a
microsseringa RTX de 25 mL	Hamilton	1702LT	usada para injeção de i.c.v.
Agulha descartável de calibre 26	TERUMO	NN-2613S	usada para injeção de i.c.v.

RTX