Imagem in vivo das respostas dos neurônios do gânglio geniculado usando microscopia epifluorescente

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Execute o painel de saborizantes
   1. Use a sucção para remover o líquido sobre o geniculado. Opcionalmente, coloque um ponto absorvente para ajudar a mitigar a infiltração e auxiliar na navegação do microscópio.
   2. Coloque o animal em uma almofada absorvente sob o microscópio. Localize o gânglio geniculado: pontos de referência úteis incluem o orifício deixado na bula, o orifício no osso temporal e o sétimo nervo. Usando o filtro FITC / GFP (isotiocianato de fluoresceína / proteína fluorescente verde) no escopo de epifluorescência, verifique se há neurônios ganglionares geniculados que expressam GCaMP individuais. Uma objetiva de 10x (distância de trabalho de 10 mm) fornecerá resolução suficiente para rastrear a atividade de células individuais, mas uma objetiva de 20x (distância de trabalho de 12 mm) também pode ser usada.
   3. Coloque a agulha dispensadora para a linha de saborizante firmemente na boca do animal. Coloque uma placa de Petri abaixo da boca do animal para coletar o fluido.
   4. Certifique-se de que a câmera esteja visualizando o campo de visão do microscópio. Sincronize o início da gravação do vídeo com o início da apresentação do sabor.
   5. Durante a gravação, assista ao feed ao vivo para obter respostas, desvios e infiltrações.