Imagem in vivo das respostas dos neurônios do gânglio geniculado usando microscopia epifluorescente

Resumo

Fonte: Fowler, B. E., et al. Imagem de cálcio in vivo de respostas de neurônios ganglionares geniculados de camundongos a estímulos gustativos. J. Vis. Exp. (2021)

Este vídeo demonstra um protocolo para administrar saborizantes ao gânglio geniculado exposto cirurgicamente em um camundongo anestesiado e usar fluorescência GCaMP com microscopia epifluorescente para visualizar respostas neuronais em tempo real, auxiliando estudos sobre o processamento do sinal de paladar periférico.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Execute o painel de saborizantes
   1. Use a sucção para remover o líquido sobre o geniculado. Opcionalmente, coloque um ponto absorvente para ajudar a mitigar a infiltração e auxiliar na navegação do microscópio.
   2. Coloque o animal em uma almofada absorvente sob o microscópio. Localize o gânglio geniculado: pontos de referência úteis incluem o orifício deixado na bula, o orifício no osso temporal e o sétimo nervo. Usando o filtro FITC / GFP (isotiocianato de fluoresceína....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
1ml Seringa com trava luer	Fisher Scientific	14-823-30
27 Gauge Agulha de Dispensação Sem Corte	Fisher Scientific	NC1372532
Pontos Absorventes	Fisher Scientific	50-930-668
Acesulfame K	Fisher Scientific	A149025G
BD com agulha permanentemente anexada	Fisher Scientific	14-829-6D
Afastadores sem corte	FST	18200-09
Placa de ensaio	Thor Labs	MB8
de poste de cabeça personalizado	eMachineShop		Veja o arquivo anexo 202410.ems
Poste de cabeça de metal personalizado	eMachineShop		Veja o arquivo anexado 202406.ems
Controlador de temperatura DC	FHC	40-90-8D
Câmera digital, sCMOS OrcaFlash4 Microscópio montado	Hamamatsu	C13440
Disection Scope	Leica	M80
LED Fonte de luz fria	Leica Mcrosystems	KL300LED
Adaptadores de Tubulação Luer Lock 1/16"	Microscópio Fisher	01-000-116
	Olympus	BX51WI
Mini-série Postes Ópticos	Thorlabs	MS2R
Placas de Petri	Fisher Scientific	FB0875713A
Ar Pressurizado	Airgas	AI Z300
Rotulagem Autoadesiva Fita	Fisher Scientific	159015R
Tubo de Válvula de Aperto de Silicone 1/32" x 1/16" o.d. (por pé)	Automate Scientific	05-14
Snap25-2A-GCaMP6s-D	JAX	25111
Tesoura Fina para Estudantes	Ferramentas de Ciência Fina	91460-11
Sonda Cirúrgica	Roboz Surgical Store	RS-6067
Suporte de Sonda Cirúrgica	Roboz Surgical Store	RS-6061
Dois Estágios	Airgas	Y12FM244B580-AG
	Fisher Scientific	22-046941
Automatismo - 1/16"	Automate Scientific	05-11
Valvelink8.2 controlador digital/manual	Automate Sistema	01-18
Valvelink8.2	Automate Scientific	17-pp-54
Xylazine	Anased	NADA# 139-236

Bandejas de alergistas Suporte BD Tubulação Intramédica Regulador de Gás de de Perfusão de Válvula de Aperto Scientific