Visualização de trombos cerebrais de camundongos usando imagens de fluorescência no infravermelho próximo

Todos os procedimentos envolvendo amostras de animais foram revisados e aprovados pelo comitê de revisão ética animal apropriado.

1. Imagem de trombo fluorescente de infravermelho próximo (NIRF) ex vivo do tecido cerebral

1. Após a decapitação, remova o couro cabeludo e corte o crânio com uma tesoura do forame magno em direção à sutura sagital. Remova a abóbada craniana elevando cuidadosamente as bordas do crânio inciso usando uma tesoura, evitando lesões no cérebro subjacente, desnudando assim os hemisférios.
2. Corte os nervos ópticos na base do cérebro o mais próximo possível da superfície do cérebro, pois eles podem se sobrepor ao círculo das artérias de Willis (COW) que devem ser visualizados em imagens fluorescentes de infravermelho próximo (NIRF). Em seguida, para visualizar a forma de Y 'artéria cerebral média (ACM) / artéria cerebral anterior (ACA) / artéria carótida interna distal (ACA)' para a imagem de trombo NIRF, corte as ACIs distais o máximo possível da superfície do cérebro após comprimir suavemente a base cerebelar para expor os pontos de corte (Figura 1A).
3. Realize imagens NIRF (excitação/emissão, 675/690 nm; exposição de 1 segundo) do tecido cerebral removido com sua base apontando para cima (Figura 1B, C), que visualiza os tromboêmbolos marcados com fluorescência nas artérias da VACA (Figura 1D). Em seguida, realize imagens adicionais com o vértice do cérebro apontando para cima, que visualiza tromboêmbolos corticais. Evite secar o cérebro colocando algumas gotas de solução salina no tecido.

Figura 1: Visão geral da imagem fluorescente de infravermelho próximo (NIRF) ex viv o de tromboêmbolos cerebrais. (A e B) Um tecido cerebral representativo foi removido de um camundongo com um acidente vascular cerebral tromboembólico. Tome precauções para não perder tromboêmbolos (seta vermelha) na área de bifurcação da artéria cerebral média (ACA) – artéria cerebral anterior (ACA) da artéria carótida interna distal (ACI, setas azuis) ao remover o cérebro. (C e D) Ex vivo Imagem de trombo NIRF. O tecido cerebral é colocado dentro da câmara à prova de luz de um gerador de imagens NIRF (C) para a visualização do trombo (seta vermelha em D) pré-marcado com o marcador fluorescente C15 de cianina 5.5 (Cy5.5) antes da oclusão embólica da área de bifurcação MCA-ACA.