Adaptação neuronal ao pré-condicionamento hipóxico repetitivo em camundongos

Resumo

Fonte: Poinsatte, K., et al., Quantificação da proteção neurovascular após pré-condicionamento hipóxico repetitivo e oclusão transitória da artéria cerebral média em camundongos. J. Vis. Exp. (2015)

Este vídeo demonstra o método de pré-condicionamento hipóxico repetitivo (RHP) expondo um camundongo a ciclos de hipóxia controlados antes de induzir um acidente vascular cerebral isquêmico. O experimento avalia seus efeitos na estabilidade da barreira hematoencefálica, adaptação neuronal e inflamação.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Pré-condicionamento hipóxico repetitivo

1. Projete quatro medidores de vazão em reguladores de gás e conecte-os a câmaras de indução padrão de 15 L com tubos de cloreto de polivinila (PVC) para permitir que o gás comprimido dos tanques de oxigênio (O₂) flua para as câmaras através de uma porta de entrada.
2. Divida os camundongos em 2 grupos: o grupo de pré-condicionamento hipóxico repetitivo (RHP), que recebe exposições a 8% e 11% de O₂, e o grupo de controle, que recebe exposições a 21% de O₂ (ar ambiente) simultaneamente.
3. Remova a tampa superior do filtro de cada gaiola e coloque a gaiola, com garrafas de comida e água intactas, nas câmaras conectadas aos seus respectivos tanques de O₂. Feche e prenda a tampa da câmara.
   1. Abra a válvula de gás principal dos tanques e ajuste o fluxo inicial para cada câmara de indução para 2 L por minuto (LPM) durante os primeiros 5 minutos de exposição. Reduza a taxa de fluxo para 1 LPM para o restante da exposição.
   2. No final da exposição, reduza o fluxo para 0 LPM e feche as válvulas de gás dos tanques.
   3. Abra as tampas da câmara e recoloque a tampa superior do filtro em cada gaiola. Coloque as gaiolas em alojamentos padrão até a próxima exposição hipóxica.
4. Pulverize cada câmara de indução com NPD (Steris) ou um desinfetante/desodorizante equivalente após cada uso.
5. Exponha os camundongos 21% e RHP na mesma hora do dia ao longo de duas semanas.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Medidores de vazão, reguladores	VetEquip, Inc	Pedido especial	Quatro medidores de vazão são conectados a um tubo de PVC flexível de 6,0 mm que se conecta à porta de entrada em cada câmara de indução com um conector fêmea de plástico. Esses medidores de vazão são aparafusados a uma barra de metal de 6,5" x 1" x 1". Esta barra de metal é aparafusada a um manômetro MI-246-P com uma saída DISS. Este manômetro e equipamento medidor de vazão pode ser conectado a cada novo cilindro de gás com uma chave inglesa.
21% O₂ tanque	AirGas	OX USP200
11% O₂ tanque	AirGas	Pedido
8% O₂ tanque	AirGas	pedido
15 L câmaras de indução	VetEquip	941454

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