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Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.
1. Imagem de bioluminescência do crescimento tumoral GL261
- Pulverize uma quantidade generosa de desinfetante (solução de cloreto de dimetil amônio a 0,05%) em uma toalha de papel limpa. Use a toalha de papel embebida em desinfetante para limpar completamente a folha preta, os cones do nariz e a divisória dentro da câmara de imagem onde os animais estarão em contato com o dispositivo. Limpe bem todas as superfícies com uma toalha de papel limpa e seca. Repita isso mais uma vez e espere 5 min.
- Inicialize a estação de imagem.
- Anestesiar o camundongo com uma mistura de 300 μl contendo 200 μl de cetamina / xilazina e 100 μl de luciferina (sal de potássio D-luciferina, 150 mg / kg) por injeção intraperitoneal.
- Aguarde 10 minutos após a injeção e confirme se os camundongos estão completamente sob anestesia beliscando a cauda. Para configurar o sistema de imagem, selecione "Luminescente", Tempo de exposição "Automático" e "Médio". Coloque os mouses na estação de imagem e clique no botão "Adquirir" para iniciar a imagem. Certifique-se de que o tempo após a injeção seja consistente com cada sessão de imagem.
- Depois que a imagem for adquirida com sucesso, uma janela de imagem e uma paleta de ferramentas devem aparecer. Clique na região de interesse (ROI) ou "Ferramentas de ROI" e selecione "automático" no ícone do círculo. Para definir ROIs, circunde a área de sinal na imagem e, em seguida, faça medições do ROI como uma unidade de fótons/seg/sr/cm2.
- Retire os camundongos da câmara de imagem e monitore-os até que se tornem deambulantes e mantenham a atividade normal. Normalmente, o tempo de recuperação é de aproximadamente 15 minutos. Não devolva os camundongos à gaiola com outros animais até que eles se recuperem totalmente da anestesia.
- Monitore o crescimento do tumor por imagem de bioluminescência duas vezes por semana até que os animais apresentem os seguintes sintomas: perda de peso (perda de mais de 20% em relação ao peso antes da implantação), inapetência (anorexia completa por 24 horas) e falta de resposta intencional sustentada a estímulos suaves (tentativa fraca de se levantar), momento em que devem ser sacrificados.
- Normalize os valores de luminescência para cada dia em relação às leituras correspondentes obtidas no primeiro dia de imagem de bioluminescência (Figura 1A).
- Para análise estatística, gere curvas de sobrevivência usando o estimador de Kaplan-Meier e compare as diferenças entre as curvas de sobrevivência usando um teste de log-rank.
