Efeitos do bloqueio do gânglio simpático induzido por etanol na regeneração nervosa em um modelo canino

Resumo

Fonte: Shionoya, Y., et al. Aplicações de bloqueio do gânglio simpático cervical induzido por etanol para promover a regeneração do nervo alveolar inferior canino usando um nervo artificial. J. Vis. Exp. (2018)

Este vídeo demonstra um modelo canino para regeneração do nervo alveolar inferior (IAN) usando um andaime biodegradável e bloqueio simpático induzido por etanol. O procedimento envolve acessar cirurgicamente o gânglio simpático cervical e injetar etanol para induzir a vasodilatação. O aumento resultante no fluxo sanguíneo para o local da lesão, combinado com a regeneração axonal guiada por células de Schwann, promove a regeneração nervosa.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Anestesia e preparação da pele

1. Anestesie o cão com uma mistura de 5 mg/kg de cloridrato de cetamina e 1 mg/kg de xilazina por injeção intramuscular.
2. Intubar com tubo traqueal de 7,5 mm de diâmetro e 25 cm de comprimento.
3. Coloque o cão na posição lateral direita. Manter anestesia geral com sevoflurano a 3,2% com oxigênio (1,0 L/min).
4. Use uma almofada de aquecimento para manter a temperatura corporal a 37 °C.
5. Aplique um gel oftálmico sobre a superfície anterior dos olhos para evitar a abrasão da córnea.
6. Depile cuidadosamente o campo cirúrgico (área do lado esquerdo do tórax) usando uma tesoura cirúrgica. Pulverize uma quantidade substancial de solução alcoólica sobre o local da operação. Aguarde pelo menos 15 segundos. Repita a aplicação 3 vezes.
7. Registre a frequência cardíaca e a saturação de oxigênio durante a cirurgia.

2. Reconstrução do Nervo Alveolar Inferior Usando tubo de colágeno de ácido poliglicólico (PGA-C): Desenvolvimento do Modelo Somente Reconstrução

1. Injete 3 mL de lidocaína a 1% usando uma agulha 27 G na gengiva mandibular esquerda como anestésico local e analgésico.
2. Realizar uma incisão transversal de 5 cm com lâmina de bisturi número 15 na gengiva mandibular esquerda para expor a mandíbula do animal.
3. Use vibrações ultrassônicas piezoelétricas para triturar o aspecto proximal da mandíbula em um retângulo de 3 cm × 8 mm através do forame mentoniano posterior.
   NOTA: A frequência de vibração foi de 28 a 32 kHz.
4. Remover a parte frontal da placa óssea mandibular (dimensões, 3 cm × 8 mm) para expor o IAN esquerdo (Figura 1A).
   NOTA: O local da reconstrução corresponde ao ápice radicular do primeiro molar
5. Transecto o IAN com bisturi para remover um segmento de 10 mm.
6. Insira os cotos proximal e distal do nervo cortado no tubo nervoso a uma profundidade de 2 mm.
7. Uso 8-0 pontos de náilon e microscópio cirúrgico com aumento de 8X para suturar o tubo nas extremidades nervosas proximal e distal (Figura 1B).
8. Retorne a placa óssea ao seu local original na mandíbula.
9. Feche a ferida com suturas de náilon 4-0.
10. Um dia após a cirurgia, confirme se a placa óssea mandibular está em sua posição correta.
    1. 4.10.1 Realize imagens de tomografia computadorizada (TC) do osso facial sob anestesia. Defina os parâmetros do TC da seguinte forma: 120 kVp, 200 mAs, 0.5 mm/s, espessura de corte de 0.5 mm.
       1. Administrar anestesia com uma mistura de 5 mg/kg de cloridrato de cetamina e 1 mg/kg de xilazina (Figura 2).
11. Administre ampicilina (100 mg/dia) como antibiótico e paracetamol (100 mg/dia) como analgésico por uma semana após a cirurgia.

3. Bloqueio do gânglio simpático cervical induzido por etanol (CSGB): Desenvolvimento do Modelo de Reconstrução + CSGB

1. Realize a reconstrução IAN conforme descrito na seção 2 e aguarde uma semana para recuperação.
2. Anestesiar o animal com sevoflurano a 1,5% em oxigênio (4 L/min) e ar (6 L/min). Faça a barba e limpe o campo cirúrgico pretendido, conforme descrito na seção 3.
3. Marque a linha de incisão com um marcador cutâneo cirúrgico desenhando uma linha na área do lado esquerdo do tórax (Figura 3, a linha de incisão tem 20 cm de comprimento).
4. Injete 5 mL de lidocaína a 1% usando uma agulha 21 G na área do tórax do lado esquerdo como anestésico local e analgésico.
5. Incise a pele do lado esquerdo do peito com uma lâmina de bisturi número 10.
6. Incise a camada de gordura com um bisturi elétrico para expor a fáscia muscular.
7. Exponha o músculo serrátil ventral e o músculo escaleno.
8. Elevar o músculo serrátil ventral e o músculo escaleno de ventral para dorsal para expor a segunda e terceira costelas (Figura 4).
9. Realizar toracotomia lateral esquerda no segundo e terceiro espaço intercostal para exposição do gânglio simpático cervical esquerdo (Figura 5).
10. Injetar 0,2 mL de etanol a 99,5% no gânglio simpático cervical usando uma agulha 30 G sob visualização direta (Figura 6).
11. Feche o espaço intercostal com pontos absorvíveis 1-0 interrompidos.
12. Feche a pele com pontos de nylon 3-0 interrompidos.
13. Administre ampicilina (100 mg/dia) como antibiótico e paracetamol (100 mg/dia) como analgésico por uma semana após a cirurgia.
14. 1 semana após o CSGB, meça a temperatura da pele facial com termografia infravermelha para confirmar o CSGB.

Resultados

Figura 1: Nervo alveolar inferior esquerdo (IAN) pré e pós-reconstrução. A) Imagem pré-reconstrução do IAN esquerdo após ser exposto pelo remoção de osso. B) Imagem pós-reconstrução do IAN esquerdo reconstruído...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Tesouras cirúrgicas	Roboz Surgical Instrument Company	RC-5903
Bisturi descartável (No.15)	Kai medical	219ABBZX00073000
VarioSurg3	Nakanishi	VS3-LED-HPSC, E1133	Cirurgia piezoelétrica para processamento ósseo
4-0 suturas de nylon	Ethicon	8881H
8-0 suturas de nylon	Ethicon	2775G
Sulfato de isepamicina	Nichi-Iko	620005641
Bisturi descartável (No.10)	Kai medical	219ABBZX00073000
agulha de calibre 30	Nipro	1134
1-0 pontos absorvíveis	Ethicon	J347H
3-0 Pontos de nylon	Ethicon	8872H
Neo Thermo	NEC Avio	TVS-700	Termografia infravermelha