Formulando um sistema transportador de exossomos carregado de dopamina

Resumo

Fonte: Yavuz, B., et al. Formulando e caracterizando um sistema transportador de dopamina baseado em exossomos. J. Vis. Exp. (2022)

Este vídeo demonstra a formulação de exossomos carregados de dopamina, com foco na permeabilização da membrana induzida por saponina para aumentar o encapsulamento de dopamina dentro dos exossomos.

Protocolo

1. Carga de dopamina nos exossomos

NOTA: Após a conclusão da caracterização dos exossomos de células-tronco mesenquimais da Wharton's Jelly (WJ-MSCs), os exossomos carregados de dopamina foram obtidos como um sistema de liberação de drogas. O carregamento de drogas nos exossomos é realizado usando o método de incubação.

1. Adicione 3 mL de solução salina tamponada com fosfato (PBS) à suspensão do exossomo. Esterilizar a suspensão diluída por filtração utilizando filtros de 0,22 μm. Transfira 500 μL da suspensão de exossomo esterilizada para outro tubo.
2. Prepare a solução de dopamina (0,5 mg / mL) com água destilada. Adicione 500 μL de solução de dopamina nos tubos que contêm os exossomos.
3. Adicione saponina à suspensão na etapa 1.2. Incubar a suspensão de exossomo-dopamina preparada durante 24 h a 37 °C. NOTA: A concentração de saponina não deve exceder 0,002% da solução total.
4. Ultracentrifugar a suspensão a 90.000 × g durante 70 min para remover a dopamina e a saponina livres do meio. Armazenar os exossomas isolados a -20 °C até à sua utilização para análise posterior. nota: Adicione ácido ascórbico a 0,02% para a estabilidade da solução de dopamina preparada.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
0.22 μm filtro de membrana	Aisimo		Usado para o processo de esterilização
15 mL Falcon tube	Nest		Usado na etapa de cultura de células
50 mL Falcon tube	Nest		Usado na célula etapa de cultura
Centrífuga	Hitachi	CF16RN	Usado na etapa de isolamento de exossomos
Cloridrato de dopamina H8502-10G	Sigma	H8502-10G	Usado no carregamento de dopamina de exossomos
Optima XPN-100 Ultracentrifuge	Beckman Coulter		Usado na etapa de isolamento de exossomos
PBS tablet	Biomatik	43602	Na preparação da solução PBS
Saponina	Sigma	47036-50G-F	Foi usado adicionando-o à solução total no processo de carregamento de dopamina do exossomo.
Células-tronco mesenquimais gelatinosas de Wharton	ATCC