Avaliando os efeitos neuroprotetores de um composto de teste em um modelo de camundongo com oclusão da artéria cerebral média

Resumo

Fonte: Lee, S. E., et al. Avaliação dos efeitos neuroprotetores do extrato de Glycyrrhizae Radix et Rhizoma usando um modelo transitório de camundongo com oclusão da artéria cerebral média. J. Vis. Exp. (2018)

Este vídeo demonstra o procedimento para avaliar o efeito neuroprotetor de um composto de teste em um modelo de camundongo com oclusão da artéria cerebral média. O composto entra no cérebro, previne a morte neuronal e reduz o volume do infarto, confirmando seu efeito neuroprotetor em comparação com um camundongo não tratado.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Modelo de camundongo de oclusão da artéria cerebral média (MCAO)

1. Use camundongos C57BL/6 machos com 6 semanas de idade e pesando 22-25 g. Forneça a todos os animais acesso gratuito a ração e água padrão e aloje-os em um ambiente com temperatura controlada (22 ±1°C) e um ciclo claro/escuro de 12 h.
   1. Divida os camundongos em grupos de seis camundongos cada, que devem consistir em grupos de tratamento normal, controle e Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GRex) operados de forma simulada.
   2. Realize a cirurgia MCAO nos grupos de tratamento controle e GRex usando um estereomicroscópio.
2. Induzir anestesia inalatória nos camundongos usando isoflurano a 2% em óxido nitroso a 70% (N₂O) e oxigênio a 30% (O₂). A anestesia é considerada suficiente quando o camundongo não responde a um estímulo mecânico aplicado à sua cauda. Mantenha a temperatura corporal dos camundongos em 36,5 ± 0,5 ° C usando um cobertor de temperatura corporal conectado a um termômetro.
3. Remova todos os pelos do peito e pescoço dos ratos raspando, seguido do uso de creme depilatório. Desinfete o sítio cirúrgico da pele com esfoliante betadine alternando com álcool duas vezes e, em seguida, faça uma incisão de aproximadamente 2 cm de comprimento com uma lâmina cirúrgica no centro do pescoço. Isole cuidadosamente a artéria carótida comum esquerda (ACCE), a artéria carótida externa e o ramo da artéria carótida interna dos tecidos conjuntivos circundantes.
4. Ligue a artéria carótida externa e a artéria carótida comum com uma sutura cirúrgica (sutura de seda 4-0, nó de meio engate) para bloquear temporariamente o fluxo sanguíneo para a artéria carótida interna durante a operação.
5. Insira uma sutura de náilon revestida de silicone (monofilamento 8-0, 11 mm de comprimento) através da artéria carótida interna até a origem da ACM esquerda. Ajuste a espessura da parte revestida de silicone do filamento para uma faixa de 0,10-0,12 mm.
6. Meça a diminuição do fluxo sanguíneo cerebral relativo (rCBF) na ACM usando um medidor de vazão Doppler a laser. O MCAO será confirmado quando o rCBF for mantido em < 20% dos valores da condição de repouso durante todo o período isquêmico.
7. Fixe o filamento inserido no vaso sanguíneo por 2 h enquanto a artéria cerebral está ocluída e, em seguida, retire cuidadosamente o filamento para restaurar o fluxo sanguíneo por 22 h de reperfusão. Suturar a pele costurando em cinco lugares (sutura de seda 3-0, dois nós de meio engate) e permitir que cada camundongo desperte da anestesia.

Materiais