Induzindo uma convulsão eletroconvulsiva aguda em um modelo de rato

Resumo

Fonte: Jang, S., et al, Convulsões eletroconvulsivas em ratos e fracionamento de seus hipocampos para examinar alterações induzidas por convulsões em proteínas de densidade pós-sinápticas. J. Vis. Exp. (2017)

Este vídeo demonstra a indução de uma convulsão eletroconvulsiva aguda (ECS) em um modelo de rato para estudar a neuroplasticidade induzida por convulsões. Os pesquisadores aplicam estimulação elétrica por meio de eletrodos de clipe de ouvido, desencadeando hiperexcitabilidade neuronal e clônus. Este modelo ajuda a investigar a plasticidade sináptica, os mecanismos de convulsão e os efeitos terapêuticos relacionados à eletroconvulsoterapia (ECT).

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Indução de ECS Aguda

NOTA: Consulte a Figura 1B, painel superior.

1. Molhe os clipes auriculares com solução salina estéril e certifique-se de que estejam saturados.
2. Molhe as orelhas de um rato com solução salina estéril, envolvendo-as em gaze embebida em solução salina. Quando estiverem molhados, remova a gaze.
3. Prenda um clipe por orelha e posicione além da faixa de cartilagem principal.
4. Confirme na máquina ECS se um loop verdadeiro foi estabelecido; caso contrário, uma mensagem de erro ou uma leitura de "1" aparecerá na máquina.
5. Use uma luva grossa e não metálica. Enquanto segura o rato suavemente com a mão enluvada, pressione o botão "SHOCK" por alguns segundos e solte lentamente o punho do rato para observar a convulsão. Para o controle simulado "sem convulsão" (NS), manuseie o rato de forma idêntica, mas não forneça a corrente.
6. Desconecte os clipes auriculares quando o clônus começar e registre o comportamento convulsivo de acordo com uma escala de Racine revisada que inclui "movimentos bucais e faciais" (estágio 1), "acenar com a cabeça" (estágio 2), "clônus do membro anterior" (estágio 3), "empinar com clônus do membro anterior" (estágio 4) e "empinar e cair com o clônus do membro anterior" (estágio 5). A convulsão deve durar aproximadamente 10 s; Registre a duração da convulsão usando um cronômetro.
7. Após o término da convulsão, devolva o rato à sua gaiola de origem. Monitore o rato por mais 5 minutos para garantir a recuperação do rato das convulsões. Mantenha-o alojado individualmente na gaiola e devolva-o à sala de recuperação.
8. Repetir a indução do SEC no rato seguinte.
9. Monitore os ratos durante o restante do dia e pelo menos uma vez pela manhã e uma vez à tarde no dia seguinte até que sejam sacrificados para experimentos.
   NOTA: O método de indução do ECS pode levar a sinais clínicos como um efeito colateral incidental, que requer atenção. Por exemplo, o protocolo de indução do ECS pode induzir convulsões que duram mais de 15 s e causar sofrimento desnecessário aos ratos. Nesse caso, interrompa a convulsão com diazepam (10 mg/kg, i.p.) ou pentobarbital (25 - 30 mg/kg, i.p.). Se os ratos desenvolverem desconforto respiratório ou anormalidades comportamentais graves após a interrupção das convulsões, eutanasia-os por inalação de dióxido de carbono seguida de decapitação.

Resultados

Figura 1: Esquema para a indução de ECS agudo e ECS crônico. (A) Um rato foi conectado a um gerador de pulsos por meio de eletrodos de clipe auricular e um choque elétrico (55 mA, 100 pulsos/s por 0,5 s) foi aplicado para pr...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Sprague-Dawley rat	Charles River Laboratories		ECS fornece
um gerador de pulsos	Ugo Bsile, Comerio, Itália	57800	suprimentos ECS