Artigo de método
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17 de junho de 2025
Este vídeo mostra a imagem de fatias de tecido de glioblastoma expressando proteína fluorescente verde (GFP) por meio de microscopia confocal. Imagens de alta resolução são capturadas em intervalos consistentes para rastrear o movimento e a direção das células tumorais.
Todos os procedimentos que envolvem a coleta de amostras foram realizados de acordo com as diretrizes do IRB do instituto.
1. Marcação de células tumorais via retrovírus que expressa proteína fluorescente verde
NOTA: A microscopia de lapso de tempo para análise da migração de células tumorais requer marcação fluorescente estável e de longo prazo das células dentro da cultura de fatias. O uso de retrovírus é sugerido porque ele infecta seletivamente as células em divisão, enriquecendo assim a marcação fluorescente dentro da população de células tumorais, em oposição à microglia ou outros tipos de células....
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| DMEM High Glucose | Invitrogen (Gibco) | 11960-044 | |
| Neurobasal-A Medium, menos vermelho de fenol | Invitrogen (Gibco) | 12349-015 | |
| B-27 Suplemento (50X), Invitrogen sem soro | (Gibco) | 17504-044 | |
| Penicilina-estreptomicina (10.000 U / mL) | Invitrogen (Gibco) | 15140-122 | |
| Suplemento GlutaMAX | Invitrogen (Gibco) | 35050-061 | |
| L-Glutamina (200 mM) | Invitrogen (Gibco) | 25030-081 | |
| HEPES (1 M) | Invitrogen (Gibco) | 15630-080 | |
| Nistatina Suspensão | Sigma-Aldrich | N1638-20ML | 10.000 unidade/mL em DPBS, processado assepticamente, BioReagent, adequado para cultura de células |
| UltraPure Low Melting Point Agarose | Invitrogen (Gibco) | 16520-050 | Derrete a 65,5 C, Permanece fluido a 37 C e endurece rapidamente abaixo de 25 C. |
| Isolectina GS-IB4 de Griffonia simplicifolia, Alexa Fluor 647 Conjugado | Thermo Fisher (Sondas Moleculares) | I32450 | Usado em meios para rotular Microglia / Macrófagos |
| pRetroX-IRES-ZsGreen1 Vector | Clonetech | 632520 | |
| Retro-X Concentrator | Clonetech | 31455 | Resina de ligação para concentração não ultracentrifugação de sobrenadantes virais |
| pVSG-G Vector | Clonetech | 631530 | parte do Sistema Universal de Expressão Retroviral Retro-X |
| GP2-293 Células de embalagem viral | Clonetech | 631530 | parte do Sistema Universal de Expressão Retroviral Retro-X |
| Cola de Cianoacrilato (Super Cola) | Sigma-Aldrich | Z105899 | |
| Molde de Incorporação Peel-A-Way de Média Viscosidade (Quadrado - S22) | Polysciences, Inc. | 18646A-1 | Moldes para incorporação de amostras de tumor |
| Micro Espátulas de Aço Inoxidável | Fisher Scientific | S50823 | Instrumento de curvatura 45 graus no pescoço da lâmina da colher |
| Curvado Fisherbrand Dissecando Pinças de Ponta Fina | Fisher Scientific | 08-875 | |
| Lâmina de Barbear de Borda Única (Lâminas de Segurança Americanas) | Fisher Scientific | 17-989-001 | A borda da lâmina tem 0,009" de espessura. A tampa de borda romba crimpada é removida antes de carregar no vibratome. |
| Leica VT1000 S Vibratome | Leica Biosystems | VT1000 S | |
| Inserto de cultura de células de PTFE hidrofílico | EMD Millipore | PICM0RG50 | 30 mm, PTFE hidrofílico, tamanho de poro de 0,4 μm |
| 35 mm Pratos com fundo de vidro | MatTek | P35G-1.5-20-C Manga | 20mm de diâmetro do vidro. Espessura do vidro da lamínula 1,5 |
| LSM 510 Micoscópio Confocal | Zeiss | LSM 510 | 10x Objetiva de Ar (c-Apochromat NA 0,45) |
| PECON Stagetop Incubator | PeCON Alemanha | (Descontinuado) | Incubadora PM 2000 RBT é um produto comprável projetado para uso com microscópios Zeiss. |
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