Nosso protocolo demonstra como colocar o gel de proteínas múltiplas em um momento de reciclagem Invitrogen Nupage cassetes Novex minigel e materiais baratos comprados em uma loja da melhoria home. Este método económico e simplificado inclui uma forma de armazenar os géis a 4 ° C durante algumas semanas. Ao re-utilizando as cassetes de gel de plástico de géis disponíveis no mercado, laboratórios que funcionam géis de proteína freqüentes podem economizar custos significativos e ajudar o meio ambiente.
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Artigo de método
Derramando e executando um gel de proteína através da reutilização Cassetes comerciais
Neste artigo
Resumo
Resumo
A avaliação de proteínas utilizando dodecil sulfato de sódio em gel de poliacrilamida a análise de electroforese (SDS-PAGE) é uma técnica comum utilizado por pesquisadores Bioquímica e Biologia Molecular 1-4. Para laboratórios que realizam análises diárias de proteínas, o custo de géis de poliacrilamida comercialmente disponível (~ $ 10/gel) pode ser considerável ao longo do tempo. Para reduzir este custo, alguns pesquisadores preparar seus próprios géis de poliacrilamida. Os métodos tradicionais de verter estes geles tipicamente utilizar equipamento especializado e placas de vidro de gel que podem ser caros e impede vertendo géis muitos e armazená-los para uso futuro. Além disso, a manipulação de placas de vidro durante a limpeza ou gel vertendo pode resultar em quebra acidental criar um risco de segurança, que pode impedir o seu uso em classes de laboratório de graduação. Nosso protocolo demonstra como colocar o gel de proteínas simultaneamente pela reciclagem Invitrogen Nupage cassetes Novex minigel, e ma baratariais comprado em uma loja da melhoria home. Este método económico e simplificado inclui uma forma de armazenar os géis a 4 ° C durante algumas semanas. Ao re-utilizando as cassetes de gel de plástico de géis disponíveis no mercado, laboratórios que funcionam géis de proteína freqüentes podem economizar custos significativos e ajudar o meio ambiente. Além disso, cassetes de gel de plástico são extremamente resistentes à quebra, o que os torna ideal para salas de aula de laboratório de graduação.
Protocolo
1. Preparando os cassetes
- Frente e verso limpo placas de um Nupage Invitrogen usado Novex cassete minigel, ou cassete minigel outro comercial.
- Preparar ml aproximadamente 1-3 de epóxi de plástico e misturar bem de acordo com as instruções do fabricante.
- Aplicar o epoxi para o bordo interior da placa frontal, onde as duas placas irá entrar em contacto quando a cassete é montado.
- Deslizar um pedaço de papel de filtro ou de papelão através da fenda inferior da placa traseira, quando a montagem da cassete para evitar excesso de epóxi de selagem da abertura. Remover o papel de filtro, logo que as duas placas são montados.
- ....
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Discussão
Eletroforese em gel de proteína é um método indispensável para laboratórios de biologia molecular mais. Minigels comercialmente disponíveis fornecer um elevado nível de conveniência, mas pode ser caro. Aqui nós mostramos como reutilizar as fitas minigel de uma popular marca de minigels disponíveis comercialmente. Este método retém a conveniência de ter uma fonte pronta de géis, mas a uma fracção do custo de minigels comercialmente disponíveis. Um passo chave neste processo está a aplicar a quantidade correcta de epoxi p.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Os autores agradecem ao Instituto Médico Howard Hughes para uma ciência UF para a concessão de Vida para AH
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Nome do reagente | Companhia | Número de catálogo | Comentários |
| Invitrogen Nupage Novex Cassete minigel (1,0 mm) | Invitrogen | NC2010 | Disponível em 2, 5, 10, 12, 15 e os poços 2D |
| Epoxy plástico | Loctite | 108771 | |
| Fita elétrica | Escocês | ||
| 125 mL frasco braço lateral | Pyrex | 5360 | |
| 4X Tris-Base Resolving tampão de gel | 1,5 M pH 8,7 Tris-base | ||
| acrilamida | Fisher Scientific | 01065-500 | |
| Bis-acrilamida | Biomedicals MP, Inc. | 800173 | |
| Solução de acrilamida 30,8% | 30:0.8 acrilamida: bis-acrilamida em O 2-H IRG | ||
| APS 10% | Fisher Scientific | BP179-25 | 0,1 g de persulfato de amónio em 1 ml IRG-H2O, preparado imediatamente antes da utilização |
| Temed | Organics Arcos | 138450500 | |
| 1-butanol saturado com 1X tampão de gel de Resolving | 05:02 1-butanol a 1X tampão de gel de Resolving | ||
| 4X Tris-Base de Dados de tampão de gel de empilhamento | 1,5 M pH 6,8 Tris-base | ||
| Pente Gel | Invitrogen | NC3015 | 15 assim, 1,0 mm de espessura |
| Sealer Impulse | TEW aparelhos eléctricos | ||
| Bolsa selável calor | Kapak / Scotchpak | 1 litro tamanho (6,5 "x 8") | |
| Gel de tampão de armazenamento | 1X tampão de gel de empilhamento com azida de sódio a 0,1% | ||
| Novex tampão de amostra SDS Tris-Glicina (2X) | Invitrogen | LC2676 | |
| TDT | FisherBiotech | BP172-5 | |
| 10X tampão de corrida Tris-Gylcine | Invitrogen | LC2675 | 1L de estoque 10X: 29,0 g Tris-Base, 144,0 g Glicina, 10,0 g SDS |
| XCell SureLock Mini-Cell | Invitrogen | EI0001 | |
| Faca Gel | Invitrogen | EI9010 | |
| SimplyBlue Seguro Mancha | Invitrogen | LC6065 |
Referências
- Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227, 680-685 (1970).
- Raymond, S., Weintraub, L. Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis. Science. 130, 711-711 (1959).
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Reimpressões e permissões
